单细胞凝胶电泳检测慢性乙型肝炎肝癌患者的DNA损伤-内科学专业论文.docx

暨 南 大 学 硕 士 学 位 论文 单 细 胞 凝 胶 电泳 检 测 慢 性 乙 型 肝 炎 肝 癌 患 者 的 损 伤 川 乙 暨 南 大 学 硕 士 学位 论 文 单细 胞 凝 胶 电泳 检测 慢 性 乙 型 肝 炎肝 癌 患 者 的 损 伤 目 录 刚 … ” ” ” ” … … … … … 二 ” … … 二 ” … … “ … 二 二对 慢 性 乙 型 肝 炎 合 并 肝 癌 患 者 损 二  … 材 料 与 方 法  … … … … … … … … 结 果 … … … … 讨 论 对 丹 参 酮 抗 慢 乙 肝 患 者 氧 化 损 伤 的 研 究  … … 材 料 与 方 法  … … … … 结 … 果  … …… … … … … … … …讨 … … 影 响 技 术 因 素 探 讨  … … … … 结 论 参 考 文 献  … …… …附 … … … … 英 文 缩 略 词  攻 读 硕 士 期 间 已 发 表 的 论 文  … …… … … … … … 致 谢 丫 严 暨 南 大 学 硕 士 学 位 论 文 单细 胞 凝 胶 电泳 检 测 慢 性 乙 型 肝 炎肝 癌 患 者 的 损 伤 目 单 细 胞 凝 胶 电 泳 又 称 彗 星 实 验 是 一 项 在 单 细 胞 水 平 上 检 测 有 核 细 胞 断 裂 的 新 技 术 川 单 细 胞 水 平 是 指 该 技 术 可 以 对 单 个 细 胞 进 行 检 测 而 不 是 对 群 体 检 测 与 传 统 方 法 相 比 技 术 更 为 简 便 快 速 灵 敏 价 廉 重 复 性 好 样 品 量 少 无 需 放 射 性 标 记 具 有 极 高 的 实 用 价 值 目 前 已 使 用 技 术 观 察 的 细 胞 有 人 体 淋 巴 细 胞 ， 表 皮 细 胞 成 纤 维 细 胞 翠 丸 细 胞 肿 瘤 细 胞 等 动 物 有 肝 细 胞 四 等 年 和 最 早 报 道 直 接 定 量 检 测 单 个 细 胞 损 伤 将 被 检 测 细 胞 包 埋 于 琼 脂 糖 凝 胶 中 进 行 裂 解 在 弱 碱 性 条 件 下 使 解 螺 旋 中 和 后 以 丫 陡 橙 染 色 用 光 度 计 测 定 绿 色 荧 光 表 明 为 双 链 损 伤 与 红 色 荧 光 表 明 为 单 链 损 伤 的 强 度 两 者 比 值 定 量 可 反 映 的 损 伤 程 度 但 由 于 该 技 术 条 件 要 求 十 分 严 格 故 未 被 广 泛 应 用 ’ 年 和 发 明 了 微 凝 胶 电 泳 技 术 将 细 胞 包 埋 于 琼 脂 糖 凝 胶 中 铺 于 载 玻 片 上 在 去 污 剂 和 高 盐 溶 液 中 溶 解 然 后 在 中 性 条 件 下 短 时 间 电 泳 断 片 从 细 胞 核 向 阳 极 移 行 从 而 形 成 类 似 于 彗 星 的 尾 巴 指 向 阳 极 如 果 细 胞 中 损 伤 严 重 断 片 移 行 的 距 离 也 就 较 长 断 片 的 移 行 可 用 嗅 化 乙 咙 染 色 再 用 荧 光 光 度 计 测 定 染 色 强 度 ’ 随 后 对 上 述 方 法 进 行 了 改 进 采 用 了 较 严 格 的 溶 解 条 件 使 中 性 成 为 检 测 双 链 断 裂 的 灵 敏 方 法 ’ 然 而 中 性 条 件 下 裂 解 和 电 泳 只 能 检 测 双 链 断 片 不 能 测 定 单 链 断 片 而 许 多 物 质 诱 导 形 成 的 单 链 断 片 数 量 比 双 链 断 片 高 一 倍 中 性 条 件 检 测 损 伤 明 显 不 如 碱 性 条 件 下 敏 感 因 此 该 技 术 有 一 定 的 局 限 性 年 等 提 出 碱 性 单 细 胞 凝 胶 电 泳 方 法 ’ 即 目 前 广 泛 使 用 的 单 细 胞 凝 胶 电 泳 在 中 性 条 件 下 双 链 不 能 打 开 只 有 暨 南 大 学 硕 士 学 位 论 文 单细 胞 凝 胶 电泳 检 测 慢 性 乙 型 肝 炎 肝 癌 患 者 的 损 伤 双 链 打 开 时 断 片 才 能 进 入 凝 胶 中 在 强 碱 性 条 件 下 双 链 被 打 开 释 放 出 断 裂 的 断 片 在 碱 性 条 件 还 可 促 使 降 解 防 止 干 扰 经 染 色 后 能 明 显 地 显 示 断 裂 灵 敏 度 大 大 提 高 该 技 术 目 前 已 广 泛 应 用 在 测 定 损 伤 与 修 复 中 在 哺 乳 类 细 胞 中 的 分 子