改性磁性壳聚糖微球固定化乳糖酶研究-食品科学专业论文.docx

刚刚摘要 刚刚 1111111111111111111111111111111111111 Y1851545 摘要 磁性高分子微球是一种新型功能性高分子材料，它兼具高分子的众多特性和磁性物 质的磁响应性。因此作为酶、细胞、药物等的载体被广泛地应用到了生物工程、细胞学 和生物医学等领域。本文选用壳聚糖和磁性纳米粒子结合制备磁性壳聚糖微球，并对其 进行接枝改性，以改性磁性壳聚糖微球作为固定化乳糖酶的载体材料。固定化的乳糖酶 可以重复凹收使用，既节约酶的消耗量，又为自动化生产管理提供了便利的条件。 主要研究内容和结论如下: (1) 采用化学共沉淀法制备磁流体，优化其制备条件。结果表明，当 Fe如/Fe3+ 物质的景之比为 112，反应温度为60.C ，熟化温度为8SC ，最终pH 值三 11， 反应时间为l.Sh 的条件下，所得磁流体粒径分布均一，有较强的磁性。利 用 XRD，TEM，VSM 及纳米粒度分析仪对样品进行表征，结果表明所得磁流 体为 Fe304 ，平均粒径为20nm 左右。 2S.C 外加磁场为饱和磁化强度为 67.3emulg ，具有超)1阴磁性特征。 (2) 采用反相悬浮聚合法，以 HEMA 与 GMA 为单体，过硫酸锻为引发剂制备 改性磁性壳聚糖微球，研究其制备机理与工艺条件，制备符合商性能载体 条件的磁性聚合物微球。研究结果表明，当水泊比为 0.25 ，加入6mLSpan80， 壳聚糖浓度为 2%(wl吟，壳聚糖与四氧化二铁质量比为 3:1 ，单体烯键与壳 聚糖单元比值为 1:1 时，所得磁性先聚糖微球具有较高的磁响应性，理想的 表观性状与性能。使用 FT-IR ，SEM，光学显微镜，TEM，激光粒径衍射 仪， VSM 和 TGA 对所得产物进行表征，结果表明 z 改性磁性究聚糖微球 呈现为规则的球形，球体表面是致密的接枝改性壳聚糖层，壳聚糖表层成 功接枝聚合上 HEMA 与 GMA 单体的聚合分子链，有环氧慕团的存在，球 体中间包裹磁流体，表现为明显的核壳结构。平均粒径为 10.67阳，且粒 径分手旨处于较窄的范围内，饱和磁强度为 7.0033 emu/g，磁滞曲线显示为无 矫顽力，具有超顺磁性。丁 GA 结果显示改性磁性壳聚糖微球中的磁流体约 为 30.7S%。 (3) 以改性磁性究聚糖微球为载体，对乳糖隅进行固定化，研究其最优固定化 乳糖酶条件。研究结果表明，载体在 0.25mol/L、 pH7.0 磷酸缓冲液中充分 溶胀后，按 2.0U/mg 载体的添加最加入乳糖酶， 4C 吸附弛，再添加 0.1% 戊二脏交联仙。最终所得的固定化乳糖酶活为 68SU/g 载体，酶活回收率为 48.18%。 固定化后的乳糖酶的 pH ，热稳定性都较游离酶有明显提高。固 定化酶Km为 49.36.固定化酶连续操作 10 次后，固定化酶活仍保持在 70% 以上，具有良好的操作稳定性。 关键词:接枝改性，磁性壳聚糖微球，固定化，乳糖酶 11 11 Abstract Abstract Magnetic pol严ner microsphere is a novel functional material which has the properties of magnetic ressponsivity and the reactivity of the function groups. As the carrier of enzyme，cell and 巾吨，位 is widely applied in many fields，such as bio-engineering ，cytology， biomedícalscience and so on. In也is pape民 chítosan magnetic mícrospheres were prepared and modífied. Lactase was immobílized on modified magnetic chitosan microspheres. Immobilized lactase can be repetitive-used. Not only the consumption of enzyme w础 reduced， but also automation management becomes possíble. The main experiments and conclutions of this paper were described as follows: Magnetic fluid was synthesized by chemical co-precipitation. W