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一种以微流控技术为基础的液滴平板读取器用于核酸和蛋白质的定量分析 一种以微流控技术为基础的液滴平板读取 器用于核酸和蛋白质的定量分析 中国实验室 生命科学仪器2011第9卷,2月刊 一 种以微流控技术为基础的液滴平板读取器用于 核酸和蛋白质的定量分析 摘要本文所描述的光学仪器,结合了液滴分光光度法的优点和平板读取器系统的高通量的能力.这项技术是基于一 种多通道多色的平板读取器——Dropsense96,并结合微流控DropPlate16/96耗材,用于1,3I群品的快速准确的紫外 一 可见光(uv—VIS)I~谱分析.它的特点是有较大的测量范围(没有样品稀释)并消除了样品的蒸发现象.DropSense96 适合标准的微流控操作,可用于全自动化的工作流程.这个系统也很适合于在生物技术实验室中的核酸以及蛋白质 样品的高通量定量分析和质量分析. 生命科学实验室正在逐步向自动化流体控制的 方向发展,以达到成本降低,产率增加以及数据的 一 致性和质量改善的目的.因此,科学家们不需要 大量繁琐沉闷的重复实验就能完成他们的研究,并 且只是需要之前实验时间的一小部分.目前,集中 于成本降低和实验速度提高的研究发展趋势,主要 是将样品体积降低到微升的水平,典型的就是将样 品放置于一个96一或者384一多孔反应板上,这在分子 诊断学中已经有很好的范例.随着分子测试需求的 增加,我们开发了一个利用12一到96一多孔反应板来 进行生物分子分离的自动化方法.这种方法促使了 全分子测试能够集成在一个自动化仪器上,它包括 了仪器控制流体和条码化的样品追踪,得到了较高 的样品处理通量;这个方法所需要的人力也更少, 并且在处理小的脱氧核糖核酸(DNA)/核糖核酸(RNA) 或是蛋白样品时,人为误差也得以消除. 虽然生物分子的分离过程现在能够快速进行 并且全自动化,但是在提取后样品质量和产量分析 中仍出现一个下游的瓶颈.对于生物分子的定量, 液滴分光光度法由于它的简易性,消耗样品体积少 以及线性测量范围较宽而被广泛使用.然而尽管如 此,分析仪器仍然需要手工操作,并且不能集成到 流体控制装置上以用于大量样品的自动化处理.相 比之下,紫外一可见光(uv—VIS)吸光度平板读取器适 合于高通量的生物分子定量,然而这需要大量的样 品来达到精确的测量,而且经常需要额外的稀释步 骤来保证样品的操作处于线性范围之内.利用插入 荧光染料和荧光平板读取器进行定量的方法,实现 了最小化的样品消耗和测试的自动化,虽然在高通 量分子实验室中该方法已被广泛接受和认可,但是 它的成本很高,而且需要额外的操作步骤和标准样 品(标准曲线). 新一代的光学仪器和符合生物分子科学协会 (SocietyforBiomolecularScience,SBS)标准的兼容微流 控耗材,结合了液滴分光光度法的优势和平板读取 器的高通量的特点,这种解决方案使得在一个高通 量,自动化的工作流程中对少量样品进行直接的定 量分析成为可能. 1技术工艺 Trinean科技(Trinean,Gentbrugge,Belgium) 基于DroPSense96多通道分光光度计与微流控 DropPlate16/96相结合,用于对1—3L样品储存和进 行uV—VIS光谱分析.PC机上的DropQuant软件可以 实现简单的实验设计及测量结果输出. 在微流控DropPlate耗材处理之后的样品吸光度 能够被DropSense96分光光度计所读取:DropPIate16 拥有16个输入孔,可用于低到中通量模式;而有96 孔,微量滴定板尺寸大小的DropPlate96可用于高通 量模式.两者都能够和流体控制仪器(SBS标准)相匹 配,并且允许简单的上样和样品的保留,以及在可 变的通路长度下对液滴的吸光度进行测量. 典型的DropPlate微流控结构包括了一个可以连 接到毛细管储存通道的输入孔,以及一个或者两个 微比色皿,如图l所示.将样品液滴滴入到输入孑L 作者简介 Dr.MontoyeisApplicationDeveloper,Trinean,DulleGrietlaan17/39050Gentbrugge,Belg ium;te1.:+3292727535;fax: +3292727539;e—mail:info@trinean.eom. 该文已获得AmericanLaboratory/Lahc0mpare再版许可. 18 生命科学仪器2011第9卷/2月刊 中国实验室 时,由于毛细管作用力,液滴会立刻进入储存通 道,这样可以减少大量的样品蒸发.因此操作人员 在样品滴人后,有2h的时间充分地进行实验.将 DropPlate插入DropSense96后,样品会在压力驱动