射干的RAPD的研究与种质资源描述规范与保存规范的制定.pdfVIP

前 言 射干为鸢尾科(Iridaeeae)植物射干Belamcandachinensis(L．)DC．的干燥根 茎，别名有扁竹、乌扇、野宣花，黄花扁蓄、黄知母等．射干具有解毒利咽、清 肺祛痰之功效。最早收载于《神农本草经》，味苦寒，入肝，肺经，Ⅸ本草纲目》 中-2：“射干能降火，故古方治喉痹咽喉为要药．”近年来临床用于治疗流感和上 呼吸道感染，常与其它药配伍治疗咳嗽，哮喘、急慢性支气管炎、小儿哮喘，效 果很好．随着射干野生资源的日益减少，为保护资源，近年来对射干的生物学， 引种和栽培已有越来越多的研究． 射干是湖北省的道地药材之一，由于野生资源日渐减少，湖北省在团风等市 县进行野生转家种的试验，获得大面积栽培成功，最多时仅团风县的栽培面积达 5000余亩，是当地农民脱贫致富的主要产业之一．为了更好地开发利用射干， 促使其走向现代化，我省于2000年开展了射干药材规范化种植研究及示范基地 建设，并于2003年通过国家科技部验收．现正在进行射干种质资源及其评价研 究课题，本课题印为其子课题． 种质资源对中药材的质量和产量有显著影响．不同种质在基因和染色体水平 上的丰富变异直接或间接作用于药材质量的形成，进而形成不同种质的质量差 异．我们在射干规范化种植(GAP)研究过程中，发现射干在人工栽培过程中， 产量和质量很不稳定，主要表现在药材性状与野生品有较大差异．我们已对射干 的栽培．病虫害、有效化学成分、采收期等方面进行了深入研究，并试图寻找出 导致不同产地射干外在表现差异的内在本质．此外，在实地考察中，我们发现不 同产地之间射干的植物形态亦有差异，如植株高矮、花色、花数、叶形．叶片长 短宽窄等均有差异，显示出其遗传多样性．本项目旨在对射于种质资源进行遗传 学研究，优选出高产质优的品种，为射干优良品选育打下良好的基础。 借鉴国内外的经验及其他药用植物上的成熟技术，本研究拟采用RAPD技 术对16个不同产地的射干进行DNA多态性分析，从分子水平上刻划射干的遗 传背景差异及其在系统分类与生药鉴定上的意义，为阐释中药道地性的生物学实 质提供崭新的线索． 本研究从DNA的提取入手，优化反应体系和扩增程序，并系统探讨扩增程 序和反应条件对扩增效果的影响，在此基础上建立起射干的RAPD技术体系， 4 再运用此技术体系对湖北省不同产区的16份射干材料进行扩增，分析其遗传多 样性、计算样品问遗传距离、并构建聚类树系图，从而为我省射干资源的分析收 集、起源演化，分类研究、多样性保护、遗传图谱构建、基因定位，进而为药用 植物资源的育种栽培、种质资源、品质评价和开发利用提供技术保障及分子生物 学依据．这将为进一步推动我省射干中药材产业的发展起到一定的作用，也为其 他药用植物进行RAPD实验提供参考和借鉴。 射干种质资源是射干新品种选育、遗传理论研究、生物技术研究和农业生产 的重要物质基础．近几年来射干的栽培面积正在逐渐扩大，由于射干资源良莠不 齐，产量高低不一，品质差异较大，已严重影响了射干的生产发展及临床应用． 因此，急需制定射干的种质资源描述规范及保存规范，以整合全国射干种质资源， 规范射干种质资源的收集、保存、鉴定．评价、研究和利用，实现射干种质资源 的充分共享和可持续利用． 射干种质资源描述规范及保存规范的制定是国家药用植物种质资源平台建 设的重要内容．制定统一的射干种质资源描述规范及保存规范，有利于整合全国 射干种质资源，规范射干种质资源的收集，整理和保存等基础性工作，创造良好 的共享环境和条件，搭建高效的共享平台，有效地保护和高效地利用现有射干种 质资源，充分挖掘其潜在的经济．社会和生态价值，促进射干种质资源研究和利 用工作的跨越式发展。 第一部分射干的RAPD研究 l 实验材料 1．1射干样品的采集 本实验所用药材为2006年7—9月采自不同产地的射干，取各药材的新鲜幼 嫩叶片，洁净后硅胶直接快速干燥，供试样品编号及产地见表1． 表1不同产地射干样品 1．2射干样品的鉴定 为了保证射干样品来源的准确性和可靠性，经湖北中医学院刘合刚教授指导 并核实结果，本实验对所采集的样品进行了物种鉴定．通过采集各地射干全株， 用常规的形态观察、显微观察、理化鉴别等手段，按照《中国药典》2005年版 规定的方法，对各地射干的药材