兔自身免疫性干眼模型制作与检测.pptVIP

兔自身免疫性干眼模型 泪腺组织RNA的提取 ： （6）弃掉上清，加入1ml的75%乙醇（提前配置：750uL无水乙醇+250uL DEPC水），倒置上下摇晃几次，4℃ 离心机10000rpm 离心5min。 （7）观察管底，避免枪头碰到管底，弃掉上清，打开管盖干燥10min。 （8）随后将RNA溶于20uL的DEPC水中，置于冰上，混匀后取1μL在NanoDrop ND-100上测RNA浓度，测三次，取其均值，记录标注好并将RNA-保存在80℃冰箱中。 兔自身免疫性干眼模型 泪腺组织RNA逆转录 ： （1）将保存于-80℃的所需的RNA置于冰上待其溶解，根据标注好所测的浓度按照1μgRNA，20μl体系逆转录，计算出不同RNA所加的体积。 （2）先将RNA所在EP管涡旋离心，将标记好的EP管分别加入计算好体积的RNA，Oligo(dT)1μl,DEPC水补到12μl，涡旋离心后置于冰上待用。 （3）用Thermo PCR仪，提前设置好温度时间，待PCR仪机器盖子温度升高后放入样本，65℃ 5min。 （4）取出样本置于冰上，每个样本按顺序加入 5×Reaction buffer 4μl Inhibitor 1μl