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转基因抗虫棉研究现状及发展趋势 　　【摘 要】长期以来，棉花深受虫害影响，导致棉花减产。随着分子生物学及重组DNA技术的迅速发展，利用基因工程技术将外源杀虫基因导入棉花获得转基因抗虫棉已成为解决棉花虫害的手段之一。本文综述了常用外源杀虫基因的种类、杀虫机理及在生产实践中的应用，并探讨了抗虫棉遇到的一些问题及今后的发展趋势。 　　【关键词】基因工程；抗虫棉；抗虫基因；研究进展 　　【中图分类号】S332.3 【文献标识码】A 　　【文章编号】2095-3089（2018）22-0048-02 　　棉花不仅是一种重要的纺织原料，也是一种重要的经济作物。长期以来棉花深受棉铃虫、棉红铃虫、甜菜夜蛾、玉米螟、蚜虫等多种害虫的侵害，其中以棉铃虫等鳞翅目害虫的危害最为严重。据调查显示上世纪90年代，棉铃虫连年爆发，每年给国家造成的经济损失多达几十亿甚至几百亿。已成为限制棉花生产的重要因素。为了有效地防治棉铃虫等害虫，通过各种技术手段培育抗虫棉具有重要意义。其中利用基因工程培育转基因抗虫棉是目前解决棉花虫害的一种主要方法。 　　一、常用的外源杀虫基因 　　一些微生物或动植物体内能产生杀死昆虫的毒蛋白，将这些毒蛋白基因导入到棉花中，可赋予棉花抗虫性。按导入的外源杀虫蛋白基因分类，转基因抗虫棉有Bt抗虫棉、蛋白酶抑制剂抗虫棉、外源凝集素抗虫棉等。目前，在生产中应用最多的主要是Bt抗?x棉。 　　1.苏云金芽孢杆菌毒素蛋白基因（Bt基因）。 　　苏云金芽孢杆菌是一类广泛存在于自然界的革兰氏阳性菌，代谢过程中能产生杀虫晶体蛋白、δ-外毒素、β-外毒素等，主要对鳞翅目、鞘翅目、膜翅目、直翅目等害虫有毒害作用，研究还发现Bt对寄生线虫、绦虫等也有影响，但对人畜无毒害作用，因此在有害生物的治理中起着非常重要的作用。 　　2.蛋白酶抑制剂基因。 　　蛋白酶抑制剂在植物中广泛存在，尤其在植物的种子中含量丰富，约占植物总蛋白的10%。迄今为止，蛋白酶抑制剂根据作用酶的活性位点的不同和氨基酸序列的同源性，分为4类：丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂、天冬氨酸蛋白酶抑制剂和金属蛋白酶抑制剂。丝氨酸蛋白酶抑制剂分为Bowman-birk型、Kunitz型、PI-I型、PI-II型等，其中Bowman-birk型中的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（CpTI）和大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因（SKTI）对鳞翅目、鞘翅目、直翅目等多数农田害虫都有毒杀作用，在转基因应用中最为广泛。其杀虫机理是：CpTI能与害虫消化道内的蛋白消化酶紧密结合形成酶-抑制复合物，使害虫体内的蛋白消化酶被抑制，当害虫取食转CpTI的植物时，就会抑制生长和发育，甚至死亡；同时，当CpTI与害虫体内的蛋白消化酶结合后，会导致害虫体内蛋白酶的过量分泌，经过神经系统的反馈调节，使害虫产生厌食反应。上述双重效应将减少昆虫对植物蛋白的摄取及利用率，最终造成昆虫因缺少必要的蛋白质而停止发育甚至死亡[3]。由于CpTI对人畜没有毒害作用，因而在转基因中有很好的应用前景。 　　3.外源凝集素基因。 　　外源凝集素是一类能特异识别并可逆地结合单糖或寡糖的蛋白或糖蛋白。在植物各组织器官中均有发现，尤以豆科植物的种子中含量最为丰富。目前人们已分离出多种外源凝集素，但大多数外源凝集素因对高等动物有毒害作用，从而限制了它们在基因工程方面的应用。其中雪花莲凝集素基因（GNA）对刺吸式和咀嚼式害虫有毒性，可以抑制害虫的生长甚至抑制其繁殖力，并且对其天敌、人畜等无害，在植物抗虫基因工程方面正日益受到重视。 　　4.新型抗虫基因。 　　除以上几种主要的抗虫基因外，昆虫神经毒素、淀粉酶抑制剂、几丁质酶基因、阴离子过氧化物酶基因、核糖体失活蛋白基因、脂肪氧化酶基因等一些新的抗虫基因正在被研究。 　　二、转基因抗虫棉存在的问题 　　尽管转基因抗虫棉在控制害虫方面取得了很大的进展，但在生产实践中仍存在一些局限性，在实践中也遇到了一些问题。 　　1. 抗虫谱较窄，害虫易产生抗性。 　　危害棉花的害虫有几百种，其中主要以棉铃虫、棉蚜、棉叶螨、斜纹夜蛾、棉红铃虫的危害最为严重。目前世界各国培育和应用的大多是Bt转基因棉，这种抗虫棉仅对棉铃虫、棉红铃虫等极少数鳞翅目害虫有抗性，对其他害虫不具有抗性。相反还增加了其他害虫的发生率，使一些次要害虫上升为主要的害虫。Wu等的研究表明，Bt转基因棉虽然减少了棉铃虫的数量，但是并没有减少蚜虫、盲蝽蟓等害虫的数量，Men等的研究则表明，Bt棉田的次要害虫盲蝽蟓可能比非转基因棉田的数量多。目前由于昆虫动态数量的变化而导致次要害虫对棉花生产所造成的损失已成为普遍现象，因此要不断地研发抗虫范围更广的抗虫基因，培育广谱性更强的抗虫棉。 　　2. 外源抗虫基因在棉花受害部位表达量低