和厚朴酚联合硼替佐米对骨髓瘤KM3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制的实验研究-内科学(血液病)专业论文.docxVIP

目 录 中文摘要 1 英文摘要 ．3 符号说明 6 材料与方法 10 结 果 ．．22 讨论 ．24 结 论 ．30 附图表 ．．3 1 参考文献 ．．41 综述 ．．49 参考文献 一58 致谢 65 攻读硕士学位期间发表的论文 ．66  CoNTENTS Chinese Abstract ”1 English Abstract······· ···· · · ····· ······-··- -··· ·· ·· ·· ···· · 。3 Symbols ··6 Preface ·7 Materials and Methods ·l 0 Results ”22 Discussion 24 Conclusion ”30 Figures and Tables ··31 Reference ·41 Review ··49 Reference ·58 Acknowledgement 65 Publications 66  山东大学硕士学位论文 和厚朴酚联合硼替佐米对骨髓瘤KM3细胞增殖和凋亡 的影响及作用机制的实验研究 专业： 内科学(血液病) ‘ 研究生： 李珊 导师： 王鲁群教授 中文摘要 背景：多发性骨???瘤(multiple myeloma MM)是一种浆细胞恶性克隆性增 生性疾病，临床上以骨痛、溶骨性病变、病理性骨折和贫血为其主要特征，迄今 为止仍然是不可治愈的。尽管新的治疗药物硼替佐米、沙利度胺和雷利度胺的应 用，在很大程度上能改善多发性骨髓瘤患者的预后，但大多数患者都因耐药而复 发，因此，需要探索多发性骨髓瘤新的治疗途径。和厚朴酚(honokiol I-INK)是从 厚朴中分离出来的具有生物活性的化合物，在治疗发热、神经系统紊乱和胃肠道 功能紊乱等方面有好的疗效。近年来和厚朴酚的抗肿瘤作用受到国内外关注，它 能够抑制肿瘤细胞生长，诱导多种肿瘤细胞凋亡，与传统的化疗药物具有协同抗 肿瘤活性。 目的：研究和厚朴酚及硼替佐米对人多发性骨髓瘤KM3细胞增殖的影响及 诱导凋亡的作用，观察和厚朴酚对KM3细胞凋亡相关基因及蛋白表达水平的影 响，进一步探讨和厚朴酚诱导细胞凋亡的作用机制。 方法：本实验分为实验组和对照组(A组)，实验组分为HNK单药组(药 物浓度为4、6、8、10、12、15}tg／mL分别是B、C、D、E、F、G组)、Bortezomib 单药组(药物浓度为5、10、20 ng／mL分别是H、I、J组)及二者联合用药组(HNK4 lxg／mL+Bortezomib5ng／mL，K组：HNK4 I_tg／mL+Bortezomib 1 0 ng／mL，L组；HNK4 I．tg／mL+Bortezomib20 ng／mL，M组)。在不同的时间(24、48、72h)采用M TT 比色法检测对照组和实验组细胞增殖活性；采用流式细胞术(FCM)检测对照组 和实验组细胞凋亡的变化及和厚朴酚对细胞周期的影响；采用Caspase分光光度 计法检测和厚朴酚对细胞内caspase．3和caspase．9酶活性的影响；用RT-PCR检 测和厚朴酚对细胞凋亡相关基因bax、bcl．2、caspase-3和caspase一9 mRNA表达  山东大学硕+学位论文 量的影响：采用Western blot检测和厚朴酚对细胞凋亡相关蛋白bax、bcl一2、 easpase-3和caspase一9的影响。 结果：和厚朴酚4．15 pg／mL对KM3细胞作用24、48、72h的细胞增殖抑制 率分别由20．38％升至80．54％、27．45％升至89．99％、44．94％升至90．91％，不 同组、不同作用时间相比，差异均有统计学意义(pO．05)。H组、I组、J组 KM3细胞48h的细胞增殖抑制率分别是13．13％、36．22％、53．99％，各组问差异 有统计学意义(pO．05)。K组、L组、M组作用48h的细胞增殖抑制率分别是 52．68％、69．99％、78．53％，联合用药组与单药组比较，差异有统计学意义(pO． 05)。流式结果显示B组、C组、E组作用于KM3细胞24h和48h后细胞凋亡率 分别是6．92％、16．15％、60．70％和18．84％、37．21％、86．07％，同一时间不同实 验组之间差异有统计学意义(班O．05)。H组、I组作用于KM3细胞24、48h的 细胞凋亡率分别是9．27％、17．87％和11．92％、53．51％，同一时间不同实验组之 间差异有统计学意义(pO．05)。K组、L组作用于KM3细胞24、48h，细胞凋 亡率分别是15．75％、22．18％和35．96％、74．70％，K组、L组细胞凋亡率明显高 于H组、I组，联合用药组和单药组比较，差异有统计学意义(pO．05)。细胞 周期