环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌的研究-农产品加工及贮藏工程专业论文.docxVIP

环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌的研究 环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌的研究 河北农业大学硕士学位（毕业）论文 河北农业大学硕士学位（毕业）论文 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 1 引言 1.1 立题的背景和意义 研究背景 志贺氏菌（Shigella）最早由 Kyoshi Shiga 于 1595 年分离并命名[1]。20 世纪 40 年代被确立为志 贺菌属，分为四个种/群：痢疾志贺菌（A 群）、福氏志贺菌（B 群）、鲍氏志贺菌（C 群）和宋内 氏志贺菌（D 群）[2]。各群志贺菌又可分为型及亚型，如痢疾志贺菌有 13 个血清型，福氏志贺菌有 6 个血清型及 13 个亚型，鲍氏志贺菌有 18 个血清型，宋内氏志贺菌只有 1 个血清型[3]。四群都可 以引起痢疾，但各群志贺氏菌致病的严重性和病死率及流行地域有所不同。其中，痢疾志贺氏菌 1 型是志贺氏菌爆发的最主要菌株[4]。 志贺氏菌是一类具有高度传染性、危害严重的革兰阴性肠道致病菌，由其临床感染所导致的志 贺菌性痢疾（shigellosis）是世界上，是发展中国家重要的传染病之一，也是发达国家腹泻病的主要 病原。全球每年的志贺菌性痢疾病例近 1.65 亿例，其中 1.63 亿发生在发展中国家，并导致 110 万患 者死亡，60%以上为 5 岁以下儿童[5,6]，发达国家如美国年发病率也达 9~10 万。 据国内综合资料，志贺氏菌属在我国感染性腹泻病原菌中居首位。志贺氏菌既可通过水，也可 通过食品传播腹泻及痢疾等疾病。据报道，国际上每年都有由志贺氏菌引起的疾病的暴发与流行。 根据 WHO 年度报告，亚（不包括中国）、非、拉各洲仅小于 5 岁的儿童，每人每年发生腹泻 2.2 次， 细菌性腹泻的病例多达 1.5～2.5 亿人。我国广大农村地区由于卫生条件差，经常有由于水源或食品 受到志贺氏菌污染而引起痢疾、腹泻等疾病流行的报道。随着近年来微生物学的不断发展，新的细 菌性腹泻病原不断被认识，及时、准确地检出腹泻致病菌对发现传染源控制疾病流行及有效地治疗 细菌性痢疾均有重要意义。 志贺菌可引起食物中毒。1992~2001 年，国家食源性疾病监测网对北京、重庆、福建等 13 个省、 自治区、直辖市，共 6.43 个亿人口监测，食源性疾病暴发事件 5770 起，患者人数 162995 人，微生 物引起的食源性疾病事件和涉及的人数最多，分别占总体的 38.5%和 50.9%[7]，引起细菌性食物中毒 患者数约为化学物食物中毒患者数的 2 倍[8]。考虑到症状轻未就诊或漏报等原因，我国实际食物中 毒人数应在 20~40 万/年，而隐性感染的人可能更多。因此,快速检测与鉴定水或食品中志贺氏菌， 不仅为及时有效地预防、治疗和控制水或食源性传染病提供依据，同时也是保障人民身体健康的必 要手段。 我国对志贺氏菌目前采用的方法是以国家标准 GB/T4789.5-2003 作为依据。整个检测过程获得 最终结果须时 5d 左右，既费时又费力，国内外均建立了采用 PCR 技术对志贺氏菌进行快速检测的 技术。 目前较为先进的志贺氏菌的检测方法有：①通过志贺菌的形态结构及染色镜检等进行检测；② 依靠血清学试验及生化反应检测，如 ELISA；③基因水平检测志贺菌，如 PCR 技术、核酸杂交技术 等。 当前科学技术飞速发展，人类对生活质量提出了越来越高的要求，食品安全问题中病原生物的 快速检测技术尤为重视。随着免疫学、生物化学、分子生物学、微生物基因组学的不断发展，传统 的细菌分离、培养及生化反应，已远远不能满足志贺菌的快速诊断及其流行病学研究，对病原生物 的鉴定已不再局限于形态学等检验上，还发展到从分子水平上检测核酸和蛋白质等生物大分子。近 年来，新的细菌诊断技术和方法不断用于微生物的鉴别，发展了不少快速、简便、特异、敏感、低 耗且实用的细菌学检测技术。 人和灵长类是志贺氏菌的适宜宿主，营养不良的幼儿、老人及免疫缺陷者更易感染。据报道， 每年约有 14000 例志贺氏菌病，但估计发病人数达 30 万。 据 FDA 统计，1997 年美国加州等 5 个州食源性疾病共为 8051 例，其中志贺氏菌引起的为 1263 例。 我国每年由于志贺氏菌引起的食物中毒事件也很多，如[9~14]： 2006 年 5 月 16 日, 邢台市某小学发生了一起学生因食用学生食堂饭菜而引起福氏 4 型志贺氏菌 食物中毒[9]。 2005 年 7 月，北京市某精神病医院陆续有多名患者发生严重腹泻。经流行病学调查证实自 2005 年 7 月 16 日，该院相继有 32 名患者发生原因不明的高热、腹痛、腹泻,经实验室检测和病原性鉴定， 确诊为一起由福氏 1a 志贺氏菌引起的菌痢爆发流行[10]。 20