环境雌激素的时间分辨荧光免疫分析新方法分析-分析化学专业论文.docxVIP

聊城大学硕士学位论文 聊城大学硕士学位论文 i  PAGE 2 摘 要 环境雌激素是环境内分泌干扰物最重要的一类物质。这类物质进入机体后，通过 干扰体内正常内分泌物质的合成、运输、释放、结合、代谢等过程，激活或抑制内分 泌系统的功能，从而破坏机体的稳定性。环境雌激素及其危害已成为世界各国关注的 焦点。时间分辨荧光因其灵敏度高、操作简便、不受样品的自然荧光干扰等优点，在 方法学研究、临床应用和分析化学中得到了广泛应用。 本课题研究的主要内容是建立时间分辨荧光免疫分析测定环境雌激素的新方法。 利用生物素-链霉亲和素的信号放大作用，采用荧光物质标记在链霉亲和素上，以具 有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物为示踪物，制备一种灵敏度高、稳定性好的新 型荧光免疫分析试剂，进而建立生物素-链霉亲和素放大的时间分辨荧光免疫分析方 法。 该研究???要包括以下几方面： 一、生物素-链霉亲和素放大时间分辨荧光免疫分析法测定己烯雌酚 以己烯雌酚完全抗原包被微孔板，板上的完全抗原和样品中的己烯雌酚竞争结合 己烯雌酚抗体，羊抗兔 IgG-生物素再与抗体结合，铕标记的链霉亲和素再与羊抗兔 IgG-生物素结合，建立了生物素-链霉亲和素放大时间分辨荧光免疫分析测定己烯雌 酚的新方法。在 1.0 pg/mL～1.0 mg/mL 之间呈良好的线性，其线性回归方程为 ΔF=925.4 lg（C）+15808.5，相关系数为 0.9944，检出限为 0.81 pg/mL。所建立的方 法用于血清中己烯雌酚含量的测定，结果满意。 二、包被抗体模式时间分辨荧光免疫分析法测定双酚 A 采用双酚A抗体包被微孔板，羊抗兔IgG-生物素与样品中双酚A半抗原竞争结合 板上的抗体，铕标记的链霉亲和素再与羊抗兔IgG-生物素结合，建立了固相抗体模式 的 生物素 - 链霉 亲和素放大 时间分辨荧光免疫分 析 测定双酚 A 的新方 法 。 在 1.0 pg/mL～ 10.0 mg/mL 之间有良好的线性 ， 其线性回归方程为 ΔF=3231.3 lg（ C ） +18959.8，相关系数为0.9948，方法的检测限为1.0 pg/mL，检出限为0.50 pg/mL。将 此方法用于食品包装袋浸取液中双酚A的测定，结果满意。 三、基于固相抗体模式时间分辨荧光免疫分析测定雌三醇  基于固相抗体竞争反应模式，采用雌三醇抗体包被微孔板，铕标记的雌三醇完全 抗原和样品中的雌三醇半抗原竞争结合板上的抗体，建立了包被抗体竞争免疫反应模 式的时间分辨荧光免疫分析测定雌三醇的新方法，在优化的条件下，在 5.0 pg/mL～ 1.0 mg/mL 之间有良好的线性，其线性回归方程为 ΔF=4601.1 lg（C）+1455.9，相关 系数为 0.9925，检出限为 4.0 pg/mL。该方法用于检测血清中雌三醇的含量，结果令 人满意。 四、包被抗原模式时间分辨荧光免疫法测定双酚A 采用正交实验优化免疫反应的条件，将时间分辨荧光免疫技术与正交实验结合起 来，以双酚 A 完全抗原包被微孔板，板上的完全抗原和样品中的双酚 A 竞争结合双 酚 A 抗体，羊抗兔 IgG-生物素再与双酚 A 抗体结合，以铕标记的链霉亲和素作为标 记物，建立了包被抗原竞争免疫反应模式的时间分辨荧光免疫分析测定双酚 A 的新 方法。此方法在 0.10 pg/mL～100.0 ng/mL 之间有良好的线性，其线性回归方程为 ΔF=1906.8+330.2 lg（C），相关系数为 0.9937，方法的检测限为 0.10 pg/mL。将此方 法用于食品包袋中双酚 A 的测定，结果满意。 关键词：铕；时间分辨荧光免疫；生物素-链霉亲和素；己烯雌酚；双酚 A；雌三醇； 正交实验 iii  PAGE 4 ABSTRACT Environment estrogen can produce interferential action to the internal secretion system, for example, they can induce the birth of oafish fetus, exceptional growth, phallic handicap, wrong metabolizability, cancer, etc. Besides some natural estrogens such as estradiol, estriol, synthetic pharmaceuticals such as diethylstilbestrol and industrial chemicals are found to be the most potent EDCs. Because of their toxi