高产γ氨基丁酸的乳酸菌的筛选-发酵工程专业论文.docxVIP

摘要本论文首先确定了GABA的测定方法，即用纸层析法定性分析GABA， 摘要 本论文首先确定了GABA的测定方法，即用纸层析法定性分析GABA， 纸层析-比色法定量分析GABA，并将测定结果与氨基酸自动分析仪的测定结 果作比较得知，本研究确定的GABA测定方法可靠，准确度高，可用作常规 检验食品、发酵液中的GABA含量。制作了GABA含量与吸光度值的关系曲 线，即GABA标准曲线，为常规检验样品中的GABA含量提供了可靠的实验 依据。确定了纸层析分析方法中展层系统和显色系统的组成，展层剂组分中 V(正丁醇)：V(醋酸)：V(水)=4：3：5为最优比例，显色剂浓度为l∥dL较为合适， 此时纸层析结果显示谷氨酸与y．氨基丁酸Rf值之差最大，即分离效果最好； 对显色时间及温度进行探讨，发现当温度为85℃，显色时间为1 0 rain时， 实验效果最明显?并对样品重复性试验、加标回收率等进行了分析，试验结 果显示纸层析-比色法定量GABA的试验方案重复性较好，相对标准偏差仅为 O．96％，加标回收试验的平均回收率为97．2％，说明此法测定几乎不受基体的 干扰，方法具有较高的可靠性，对后续研究工作奠定了坚实的基础。 以山东轻工业学院食品与生物工程学院保藏菌种植物乳杆菌1．11、乳酸 链球菌乳酸亚种1．0018、嗜酸乳杆菌La、保加利亚乳杆菌Lb、嗜热链球菌 S圩；购于中科院微生物菌种保藏中心的乳酸链球菌1．1690、发酵乳杆菌 1．1880、乳酸链球菌1．1936；以及分离自威海兰陵味精厂生产车间附近土壤中 的细菌w1、W2、w3等菌株为出发菌种，采用透明圈平板法筛选、高酸高渗 法筛选以及三角瓶发酵复筛相结合的办法，提高了获得高产菌株的机率，从 而最终获得一株十氨基丁酸高产菌株乳酸链球菌乳酸亚种1．0018。 通过研究碳源、氮源、碳氮源比例、发酵温度、发酵初始pH、接种量等 多种因素对乳酸链球菌乳酸亚种1．0018产GABA发酵条件的影响，我们初步 掌握了比较优化的发酵条件。根据实验结果我们得到优化的培养基组成为： 葡萄糖1．5％、 酵母膏1．0％、蛋白胨1．5％、乙酸钠0．2％、Glu 1．5％、 MgS04‘7H20 20mg／kg、№S04·4H20 lmg／kg、NaCl lmg／kg、FeS04·7H20 lrng／kg，pH6．8。验证实验的结果表明乳酸链球菌乳酸亚种1．0018在优化后的 发酵培养基中培养16h后，发酵液中的GABA含量达到2．7m∥mL，是最初 筛选培养基(o．68m∥mL)的4倍。 关键词 Y一氨基丁酸；纸层析；乳酸链球菌乳酸亚种；筛选 ABSTRACTThe ABSTRACT The study first determined the method ofdetection for GABA,which is using paper chromatography to qualitatively analyse GABA，and using paper chromato— graphy and colorimetry to quantitatively analyse GABA,then compared with the detecting result ofAutomatic amino acid analyser,we found that the method of detection for GABA determined in this study is realiable，highly eXact．They Can be used to regularly detect the content of GABA in food and fermentation sample． We made out the relation curve of GABA content and 0D520 value．which iS alSO called standard carve of GABA and provide realiable experimental data for detec— ting the GABA content in samples．Furthermore，we determined the composition of exlfition layer system and color system included in paper chromatography．The best ratio ofthe exhition layer agent is V(butan01)：V(acetate)：V(water)equals 4：3：5，and the proper c