高产GABA乳酸菌的筛选应用及包被GABA瘤胃稳定性和对延边黄牛血液相关指标的影响-动物营养与饲料科学专业论文.docxVIP

学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。尽我所知， 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。尽我所知， 除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的材料。与我一同工作的同事对本 研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本人如违反上述声明。愿意承担由此引发的一切责任和后果。 研究生签名 日期： 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档，可以借阅或上 网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关部门或机构送交并授权其保存、借阅或上 网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按保密的有关规定和程序处理。 本学位论文属于： 1．保密 o，在 年解密后适用于本声明：2．不保密v‘ 呲始鞋导蓬辜 趔』生互月 万方数据 延边大学农学硕士学位论文摘要 延边大学农学硕士学位论文 摘要 1，．氨基丁酸(丫．aminobutyric acid，GABA)是生物体内谷氨酸在谷氨酸脱羧 酶(Glutamate decarboxylase，GAD)的作用下进行脱羧，形成的一种广泛存在于 自然界，具有抑制神经传递的非蛋白质氨基酸。GABA参与体内多种代谢活动， 对动物具有抗应激、调节激素分泌、改善胴体品质、提高繁殖性能等作用。乳酸 菌是含有GAD的一种国际公认的有益菌，利用乳酸菌和其GAD进行GABA的 富集是生产中的一个重要途径，本试验主要研究筛选具有高产GABA能力的乳 酸菌，将其GAD应用于畜牧业饲料添加剂GABA的生产，并运用GABA到延 边黄牛中，为乳酸菌的应用和GAD运用于饲料添加剂GABA的生产同时为 GABA在延边黄牛中的应用提供理论依据。本论文主要包括以下几方面的研究。 1．高产Y．氨基丁酸乳酸菌的分离筛选及初步鉴定 本章利用梯度稀释法和纸层析法从辣白菜、酸菜、酸奶中分离筛选出具有 GABA合成能力的乳酸菌，利用高效液相色谱(HPLC)法对乳酸菌发酵液中 GABA的含量进行测定，并对具有较高合成GABA能力的乳酸菌进行初步鉴定， 结果发现从酸菜分离筛选的乳酸菌Bl产GABA量最高，可达3．12lg／L。 2．高产GABA乳酸菌发酵米糠生产Y．氨基丁酸的条件优化研究 利用乳酸菌发酵廉价农副产品米糠，研究单因素发酵温度、发酵时间、菌液 添加量、磷酸吡哆醛(PLP)浓度、氯化钙(Cacl2)浓度对米糠发酵液中GABA含 量的影响。在单因素试验的基础上采用正交分析法对发酵米糠条件进行优化，确 定乳酸菌发酵米糠富集GABA的最优条件为发酵溶液中PLP浓度为0．10mmol／L Cacl2浓度为I．5mmol／L，菌液添加量为3．5％(v／v)，发酵时间为24h时，米糠发 酵液中GABA含量可达335mg／1 009。 3．谷氨酸脱羧酶酶学性质研究及在饲料添加剂中的应用 以乳酸菌Bl为研究菌种，研究温度、pH、磷酸吡哆醛、金属离子等与GAD 活性的关系以及乳酸菌Bl的Vmax和Km值，确定GAD活性最大时所需要的 温度、pH等，然后利用GAD和L-谷氨酸的脱羧反应生成GABA来进行饲料添 加剂GABA的生产，结果得出乳酸菌Bl的GAD最适温度为40℃，在30—50℃ 范围内稳定性良好；最适pH为4．5，pH在3．5．5．5时稳定性良好；PLP和VB6 浓度为0．05mmol／L时，酶活力最大；Ca2+、M92+、Mnz+对酶活有激活作用，SDS、 I。、Ag+、CI‘、CH3COOH、EDTA对酶活有抑制作用；对底物的Km=0．0601mmoVL Vmax=1．98I．tmoi／min；利用GAD的酶学性质进行饲料添加剂GABA的制备，试 验可行性强，GABA的含量可达8．96％(w／w)。 万方数据 延边大学农学硕士学位论文4．y．氨基丁酸的稳定性研究及对延边黄牛整肠消化率、内分泌激素、免疫指标、 延边大学农学硕士学位论文 4．y．氨基丁酸的稳定性研究及对延边黄牛整肠消化率、内分泌激素、免疫指标、 抗氧化能力和血常规的影响 4．1包被GAB?,的过瘤胃特性研究 主要对两种不同材料包被的GABA进行体内瘤胃降解率试验和体外瘤胃后 释放试验，发现它们在瘤胃中的降解率在24h的时候分别为20．97％和24．91％， 瘤胃后释放率在12h的时候均达到90％以上，综合比较，表明用棕榈酸包被制成 的GABA更适合运用于延边黄牛。 4．2 1，．氨基丁酸对延边黄牛整肠消化率、内分泌激素、免疫指标、抗氧化能力和 血常规的影响 在延边黄牛基础日粮中添加包被GABA，结果表明GABA对延边黄牛整肠 消化率没有影响