褐飞虱中肠上皮细胞膜结合氨肽酶N在Sf9昆虫细胞内的-CABIorg.PDFVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2018, 26(5): 839~848 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2018.05.012 褐飞虱中肠上皮细胞膜结合氨肽酶N 在Sf9 昆虫细胞内的表达 1 1,2 1 1 1 1* 林莉 邵恩斯 陈雪琳 张娇 黄天培 关雄 1 福建农林大学生命科学学院/生物农药与化学生物学教育部重点实验室/省部共建闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室,福州 350002 ；2 福建农林大学 国家菌草工程技术研究中心,福州350002 *通讯作者, guanxfafu@126.com 摘 要 褐飞虱(Nilaparvatalugens)是中国水稻(Oryzasativa)生产中对水稻危害极为严重的农业害虫之 一。随着微生物杀虫剂苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringsis, Bt)的使用及转Bt 杀虫基因作物的推广，对Bt 不敏感的褐飞虱的防治将成为难点。当前研究表明Cry 毒素与靶标昆虫中肠膜结合氨肽酶N (aminopeptidase N, APN) 的结合是Bt Cry 毒素毒理机制中的重要步骤。本研究对褐飞虱转录组数据中获 得的一个褐飞虱中肠apn基因进行全长克隆，构建Bacmid-bphAPN 重组杆状病毒载体，并在草地贪夜蛾 (Spodopterafrugiperda)卵巢细胞(Sf9) 中表达。经Western blot 、蛋白质谱及免疫荧光定位检测证实bphAPN 蛋白成功表达。细胞毒性实验结果显示表达了褐飞虱中肠APN 的Sf9 细胞对Cry1Ac 活化蛋白不敏感。 褐飞虱中肠APN 的体外真核表达有助于褐飞虱中肠APN 的特征分析，为开发对褐飞虱有毒性作用的新 型Cry 毒素提供了资料基础。 关键词 褐飞虱, 氨肽酶N(APN), Sf9, 免疫荧光定位 中图分类号 S186; Q966 文献标识码 A Expression of Membrane- bound APN from Brown Planthopper (Nilaparvatalugens) Midgut Epithelial Membrane in Sf9 Cell Line LIN Li1 SHAO En-Si1,2 CHEN Xue-Lin1 ZHANG Jiao1 HUANG Tian-Pei1 GUAN Xiong1* 1 School of Life Science, Key Laboratory of Biopesticides and Chemical Biology, Ministry of Education, State Key Laboratory of Ecological Pest Control for Fujian and Taiwan Crops, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China; 2 China National Engineering Research Center of Juncao Technology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China *Corresponding author, guanxfafu@126.com Abstract The brown planthopper (BPH)(Nilaparvatalugens) is one of the insect pests significantly damage the rice production in China. Transgenic crops, carrying Bacillusthuringsis (