高密度脂蛋白拮抗氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞中胱硫醚γ裂解酶表达的下调-内科学(心血管)专业论文.docxVIP

福建医科大学硕士学位论文 福建医科大学硕士学位论文 目 录 附录…………………………………………………………1 中文摘要………………………………………………………………2 英文摘要………………………………………………………………4 前言……………………………………………………………………6 材料和方法…………………………………...……………………….9 1. 材料和试剂9 1.1 实验动物9 1.2 脂蛋白9 1.3 主要试剂9 1.4 主要仪器10 2. 实验方法10 2.1 细胞培养10 2.2 HDL 和 LDL 的提取和 LDL 的氧化 11 2.3 免疫印迹12 2.4 mRNA 提取及 qRT-PCR. 13 2.5 硫化氢的测定15 2.6 ROS 释放检测 16 2.7 细胞转染16 结果…………………………..……………………………………….17 1. 提取的 HDL 和 LDL 纯度分析17 ox-LDL 下调 VSMC 中 CSE 的蛋白和 mRNA 表达 17 HDL 诱导 VSMC 中 CSE 表达 19 4. HDL 呈时间剂量依赖诱导 VSMC 中 H2S 的释放 20 5. HDL 拮抗 ox-LDL 对 CSE 的下调作用 21 6. HDL 呈浓度和时间依赖诱导 VSMC 中 HO-1 的表达 22 HDL 拮抗 ox-LDL 诱导的 ROS 释放 22 HDL 诱导 ERK、AKT、p38/MAPK 磷酸化激活 23 ERK、AKT、p38/MAPK 抑制剂削弱 HDL 诱导的 VSMC 中 HO-1 蛋白 表达 24 ERK、AKT、p38/MAPK 抑制剂削弱了 HDL 对 ox-LDL 诱导 ROS 释放 的拮抗作用 25 ERK1/2、AKT、p38/MAPK 抑制剂削弱了 HDL 诱导的 VSMC 中 CSE 蛋白表达和 HDL 对 ox-LDL 诱导的 CSE 蛋白表达的下调 26 HDL 通过 HO-1 调节 VSMC 中 CSE 蛋白的表达 27 讨论……………………………………………..……………………..29 结论………………………………………………..…………………..32 参考文献（1）………………………………..………………..33 综述……………………………………….………………………...41 参考文献（2）……………………………………………..…………50 致谢……………………………………………….…………………...60 PAGE PAGE 10 中英文缩略词表 缩略词 英文全称 中文注释 HDL High-density lipoprotein 高密度脂蛋白 LDL Low-density lipoprotein 低密度脂蛋白 ox-LDL oxidized low density lipoprotein 氧化型低密度脂蛋白 H2S CBS Hydrogen sulfide Cystathione beta-synthase 硫化氢 胱硫醚β合成酶 CSE Cystathionine gamma-lyase 胱硫醚γ裂解酶 3-MST 3-mercaptopyruvate sulfurtransferase 丙酮酸巯基转硫酶 ROS Reactive oxygen species 活性氧簇 HO-1 heme oxygenase 1 血红素氧化酶 1 DCFH-DA 2,7-dichlorodihydroflurescein diacetate 2，7-二氯荧光黄双乙酸盐 VSMC Vascular smooth muscle cell 血管平滑肌细胞 ICAM-1 intercellular adhesion molecule-1 细胞间粘附分子 VCAM-1 vascular-cell adhesion molecule-1 血管细胞粘附分子 PDGF platelet-derived growth factor 血小板源性生长因子 FGF fibroblast growth factor 成纤维细胞生长因子 apoA-I Apolipoprotein A-I 载脂蛋白 A-I NO nitric oxide 一氧化氮 eNOS Endothelial nitric oxide synthase 内皮型一氧化氮合酶 LPS Lipopolysacchatide 脂多糖 S1P Sphingosine 1-phosphate 1-磷酸鞘氨醇 高密度脂蛋白拮抗氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞中 胱硫醚 γ 裂解酶表达的下调 中文摘要 目的：高密度脂蛋白（High density lipoprotein，HDL）拮抗氧化型低密度脂蛋白 （Ox