高密度脂蛋白的抗内毒素作用-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

——垦!!!!!奠旦垦i!P!!堡!!i坚!g巫望坠!坠g!!!苎也塑!i!i!!摘要 ——垦!!!!!奠旦垦i!P!!堡!!i坚!g巫望坠!坠g!!!苎也塑!i!i!! 摘要 本实验分别采用聚乙二醇一6000(polyethylene glycol 6000，PEG． 6000)沉淀法制备人血浆高密度脂蛋白(PEG．HDL)和超速离心法 制备人血浆高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL) (d=1．063—1．2l g／cm 3)，用琼脂糖凝胶电泳和SDS一聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS)鉴定得 到纯的HDL。分别给小鼠注射内毒素(1ipopolysaccharides，LPS)， LPS+PEG—HDL；LPS，LPS+HDL，LPS+HDL+无脂蛋白血浆 (1ipoprotein free fraction，LFF)(d1．2l g／era3)：LPS，LPS+LFF： 观察小鼠的死亡率和存活时间。结果显示：LPS+PEG．HDL组小鼠的 死亡率(10％)低于对照LPS组(90％)，存活时间(67．1 5±l 5．21 h) 显著高于对照LPS组(44．67±21．77 h)(P0．05)；LPS+HDL+LFF 组小鼠的死亡率(30％)低于对照LPS组(100％)，存活时间57．78 ±23．81 h)显著高于对照LPS组(1 8．45±2．20 h)(P0．05)，而 LPS+HDL组小鼠的死亡率(80％)略低于对照LPS组(100％)，存 活时间(27．28±23．60 h)略高于对照LPS组，但无显著性差异 (P0．05)：LPS+LFF组小鼠的死亡率(60％)高于对照LPS组(20％)， 存活时间(48．43士20．91 h)低于对照LPS组(65．07士14．62 h)，但均 没有显著性差异(PO．05)。以上结果显示HDL可以保护小鼠免受 内毒素的损伤，HDL起作用需要LFF的协同作用，但是LFF本身并 不具备保护小鼠免受内毒索损伤的功能。 我们用异硫氰酸荧光素酯标记的内毒素(fluorescein i sothiocyanate·lipopolysaccharide，FITC-LPS，d21．44 g／cm 3)与人 血浆培育后超速离心，观察FITC-LPS在人血浆中的分布。结果显 示：FITC—LPS主要分布在密度为1．063．1．21 g／cm3部分(60．39％)， 而密度小于1．028 g／cm3部分及密度为1．028·1．063 g／cm3部分的 堡旦!!!!望旦垦i!￡塑!!!!i坠g!g!i望!!!翌!坐!：i!垫：i!izFITC—LPS仅占0．28％和2．49％，这表明FITC．LPS与血浆培养后主 堡旦!!!!望旦垦i!￡塑!!!!i坠g!g!i望!!!翌!坐!：i!垫：i!iz FITC—LPS仅占0．28％和2．49％，这表明FITC．LPS与血浆培养后主 要与HDL结合，极少量与LDL结合，而几乎不与VLDL相互作用。 将FITC—LPS、HDL及LFF培育不同时间(0-3h)后密度梯度 超速离心，观察不同培育时问HDL中FITC．LPS的含量。结果显示： 随着HDL与FITC-LPS培育时间增加，密度小于1．21 g／cm 3部分 (HDL)结合的FITC．LPS从38．23％(10 rain)逐步增加到50．51％ (3 h)，而在密度大于1．2l g／cm 3部分(LFF)游离的FITC．LPS从 61，77％(10 rain)逐步降到49．49％(3 h)。表明随着培育时间增加 部分游离FITC．LPS逐步转变为HDL结合的FITC．LPS。同时也证明 了HDL与LPS结合是稳固的，在超离心力作用下不会发生解离。 我们用LPS+HDL、LPS+LFF、LPS+HDL+LFF及LPS分别与 小鼠腹腔巨噬细胞培养后用ELISA方法测定培养上清液中巨噬细胞 释放TNF．o的含量。结果可见LPs+HDL组、LPS+LFF组、 LPS+HDL+LFF组及LPS组刺激巨噬细胞产生TNF．a的量分别为 50．303±2．957 pg／ml，98．485±9．363 pg／ml，5．606+__9．816 pg／mt及80，758± 16．328 pg／mI。LPS组与LPS+HDL+LFF组及LPS+HDL组之间存在显 著住差异(P0．05)，LPS+HDL组与LPs+HDL+LFF组之间也存在 显著性差异(P0．05)，而LPS+LFF组与LPS组无显著性差异 (P0．05)。结果表明HDL能够抑制LPS刺激巨噬细胞分泌TNF—a， LFF的加入能够加强这种抑制作用，