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《常见动物源性成分快速测定膜芯片法》.PDF

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《常见动物源性成分快速测定膜芯片法》 国家标准征求意见稿 编 制 说 明 标准起草小组 二〇一七年七月六日 1 目 录 1.概况 1.1 任务来源 1.2 标准起草单位 1.3 工作概况 2 .背景及研究现状 2.1 动物源成分检测研究概况 2.2 主要检测方法 2.3 膜芯片的来源与检测原理 3.标准编制原则 4.标准编制依据 5.标准制定过程 5.1 标准基本框架及预研 5.2 提交标准草案 5.3 国家标准立项 5.4 国家标准验证 5.5 形成标准征求意见稿 6. 实验过程及参数确定 6.1 动物源性成分检测膜芯片点阵 6.2 PCR 反应使用的引物序列 6.3 目标基因探针序列 6.4 多重PCR 反应体系 6.5 PCR 反应参数 6.6 膜芯片杂交 6.6.1 杂交体系配制 6.6.2 酶孵育体系配制 6.6.3 膜芯片杂交 6.6.3.1 手动杂交 2 6.6.3.2 自动杂交 6.7 膜芯片的结果判读 7.方法效果实验评估 7.1 特异性评估 7.2 可重复性和可再现性评估 7.3 灵敏度评估 7.4 稳定性评估 7.5 实际样品测试 7.6 验证 7.6.1 验证单位 7.6.2 验证结果 7.6.2.1 假阴性和假阳性结果测试 7.6.2.2 灵敏度和重复性结果测试 8.结论 8.1 验证结论 8.2 验证样本 3 《常见动物源性成分快速测定 膜芯片法》国家标准征求意见稿 编制说明 1.概况 1.1 任务来源 本国家标准的制定是根据国家标准化管理委员会:《关于下达2017 年第一批 国家标准制修订计划的通知》的通知:项目名称:“常见动物源性成分快速测定 膜芯片法”,项目编号T-424 ,计划执行日期为:2017-2018 年。 1.2 标准起草组 本标准起草单位包括中国标准化研究院、四川华汉三创生物科技公司、山东 省食品药品检验研究院、安徽省食品药品检验研究院、安徽出入境检疫检验局、 滨州市食品药品检验检测中心、成都市食品药品检验研究院、江西省食品药品检 验研究院、上海市兽药饲料检测所等。 1.3 标准概况 在动物源性成分的测定中,已制定一系列国家标准:GB/T25165-2010 明胶中 牛、羊、猪源性成分定性检测方法实时荧光PCR 法;GB/T21101-2007 动物源性 饲料中猪源性成分定性检测方法 PCR 法。基于核酸的检测方法和基于蛋白的检 测方法是目前检测动物源成分的两种主要方法。传统的 PCR 方法存在检测效率 低、假阳性高、易污染、成本高的缺点,很难满足批量大、高效快速的检验要求。 而荧光PCR 虽然检测速度较快,但是每次反应只能检测1-3 种指标,指标较少, 对于盲样检测,检测成本较高。相对于现行标准中公布的检测技术,膜芯片方法 可以在进行多指标并行检测的同时,实现快速、灵敏、方便、成本低、准确、高 通量、自动化、低假阳性和可视化的动物源成分测定。 在制定本标准时参阅了国内外DNA 的提取技术、样品制备及相关的国家标 准、应用及测定有关的技术文献和分析方法,确定本方法的基本原理和试验技术 流程。 2.背景及研究现状 2.1动物源成分检测研究概况 我国是禽畜产品生产和消费大国。食品及饲料中动物源性成分的检测关系食

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