Gal3ST2和SulfoLex影响人肝癌细胞黏附和增殖的子机制研究.docxVIP

—————————————————墨旦堂堕主堂篁笙苎半乳糖：3-0一磺酰基转移酶．2和3-sulfo．Lex与肿瘤黏附和 —————————————————墨旦堂堕主堂篁笙苎 半乳糖：3-0一磺酰基转移酶．2和3-sulfo．Lex与肿瘤黏附和 增殖关系的研究 中文摘要 半乳糖：3-0．磺酰基转移酶．2(Gal：3-0．sulfotransferase．2，Gal3ST-2)是一个新 近克隆的磺酰基转移酶，位于人染色体2q37．3，催化外侧糖链末端半乳糖3位羟 基的磺酰化，可作用于I型或Il型糖链，其生物学功能还不明确。磺酰化Lewis 抗原(3-Sulfo-pGal1，3／1，4(0【1，4／1，3Fue)GlcNae．R，sulfo．Lewis)是N．连接或O．连接 糖蛋白的外侧岩藻糖基化的乙酰半乳糖胺(即Lewis抗原)的磺酰化糖链。通过 GaLl3ST的催化，将磺酰基团从PAPS分子上转移到外侧糖链的半乳糖3位羟基 上，最后通过岩藻糖基化而形成，参与磺酰化Lewis抗原合成的磺酰基转移酶主 要是Gal3ST-2和Gal3ST-3。以前的研究表明磺酰化的半乳糖链与肿瘤的转移相 关，高分泌型的大肠癌LSl74T-HM7细胞株(从大肠癌细胞LSl74T中筛选出的 具有更高肝脏转移潜能的突变株)合成的黏蛋白上外侧糖链主要是 3-sulfo．Lex(sulfo．3Gall31．4(Fucal．3)GIcNAc．R)抗原簇，它的合成需要Gal3ST-2 的参与。而本实验室以前的研究结果也证实了Gal3ST-2可以通过影响整合素的 表达来参与肝癌细胞的转移。通过血液和淋巴的转移是肿瘤细胞在发生发展过程 中获得的一种能力，除此之外，肿瘤细胞相对正常细胞来说还有对抗生长抑制因 子的能力、在缺乏内源性生长因子的调节下增殖的能力、无限复制的潜能和规避 凋亡的能力。Gal3ST-2和sulfo．Lex是否会对这些方面产生一定的影响引起了我 们的关注。因此，我们的研究着重探讨了Gal3ST-2和sulfo-Lex对肿瘤细胞黏附 和增殖的影响及其相应的分子机制。研究分为两个部分。 第一部分GaBST．2和Sulfo．Lex参与肝癌细胞黏附的机制研究 由于Gal3ST-2在很多肿瘤细胞中表达较高，所以我们采用RNA干扰技术显著 降低Gal3ST-2的表达，进一步探讨Gal3ST-2参与肿瘤进展的可能机制。在肝癌细 胞SMMC．7721中转染Gal3ST-2 siRNA质粒，48h后通过RT-PCR检测，证实细胞中 Gal3ST-2的表达明显降低，而且与阴性对照质粒转染的细胞相比，细胞形态由原 来的多边形变为近似梭形，与细胞培养器皿的黏附性下降，而且更容易被胰酶消 化。为了进一步探讨Gal3ST．2对肿瘤进展中细胞的黏附起重要的作用，我们观察 TGal3ST-2 siRNA转染的细胞与VN的黏附能力，结果发现此细胞的黏附能力明 显下降。而且在Gal3ST-2 siRNA转染的细胞中，整合素中的州亚基明显下调，而 B3的表达无明显改变，这与Gal3ST-2同家族的脑苷脂磺酰基转移酶(CST)对整合 B3的表达无明显改变，这与Gal3ST-2同家族的脑苷脂磺酰基转移酶(CST)对整合 素的调节类似。为了研究磺酰化le晰s抗原的作用，我们在细胞中加入了外源性的 Le、Ⅳis—x trisaceharide和Lewis．x trisaeeharide 3-sulfatesodium salt。结果表明Lewis-X trisaccharide 3-sulfatesodium salt促进了细胞与VN之间的黏附，增加了整合素亚单 位dv的表达，但Lewis．X trisaccharide处理的细胞与对照相比没有明显的改变。这 一结果表I明Lewis抗原的磺酰化修饰对于细胞的黏附功能来说至关重要。而且 Le、)l，is．x tfisaccharide 3-sulfatesodium saltfl邑够在Gal3ST-2被干扰的SMMC一7721细 胞中发挥同样的作用，并使得细胞的形态由偏梭形趋向正常的多边形，而加入 Lewis．x trisaccharide或对照细胞的形状未有明显的改变。这说明sulfo．Lewis虽然 不是Gal3ST-2催化的唯一产物，但却是一种重要的产物，它可以在某种程度上弥 补Gal3ST-2的缺乏对肝癌细胞带来的影响。 第二部分GaDST．2与sulfo．L矿参与肿瘤存活、增殖和凋亡的机制研究 为进一步探讨Gal3ST-2与sulfo．Lex的调控机制，我们又观察了Gal3ST-2与 sulfo-Lex对SMMC．7721细胞增殖和凋亡的影响。将Gal3ST-2干扰质粒转染人肝 癌细胞系SMMC-7721后，发现细胞的增值