AQP9基因在水牛卵泡颗粒细胞中的达及其与细胞凋亡的初步研究-动物遗传育种与繁殖专业毕业论文.docxVIP

酸化位点和水通道蛋白特有的结构域Pfam 酸化位点和水通道蛋白特有的结构域Pfam MIP。 其次，对AQP9基因在水牛雌性生殖细胞中的表达规律研究发现：AQP9 蛋白在水牛原始、初级、次级和有腔卵泡颗粒细胞中均有表达。qRT-PCR 分析结果显示，与GV期相比，AQP9基因在体外成熟的MII期卵母细胞中 的表达水平显著升高(p0．05)，在2．细胞、4．细胞胚胎及桑椹胚中未检测 到其表达，囊胚期有表达。在不同闭锁程度水牛卵泡颗粒细胞中，随着卵 泡闭锁程度加深，AQP9及凋亡相关基因Bax、caSp2Lse3和Fas的表达呈上 升趋势，其中AQP9基因的表达在早期闭锁卵泡中显著升高(∥0．05)。在 不同体外成熟质量卵母细胞周围卵丘细胞中的表达分析发现，与成熟质量 好的卵母细胞卵丘细胞相比，AQP9基因在成熟质量差的卵丘细胞中的表达 显著升高(正0．01)；同时凋亡相关基因Bax、caSpaSe3和Fas的表达也显 著升高(胙0．05)。 最后，在探讨水牛颗粒细胞凋亡与AQV9表达关系的研究发现：过表 AQP9基因的水牛颗粒细胞经无血清培养可显著上AQP9及凋亡相关基因 Bax、caspaSe3、Fas的表达，显著下调Bcl一2的表达(正0．05)。在分析PKC 抑制剂Staurosporine介导的水牛颗粒细胞凋亡与AQP9基因表达关系的实 验中发现，Staurosporine处理的水牛颗粒细胞，其形态出现塌陷，细胞膜出 现拉丝样向周围分散，胞质空泡增多，悬浮死亡细胞增多，流式分析结果 显示，Staurosporine以浓度依赖型促进颗粒细胞凋亡，且随着颗粒细胞凋亡 程度的加深，AQP9及凋亡相关基因caLspase3、Bax和p53的表达显著上调 (p0．05)，AQP9和Bax蛋白的表达亦随着细胞凋亡程度的加深而升高。 万方数据 以上结果说明，AQP9基因在不同物种中具有较高的保守性，并参与了 以上结果说明，AQP9基因在不同物种中具有较高的保守性，并参与了 水牛卵泡发育、卵母细胞成熟、早期胚胎发育及卵泡闭锁等过程。表达于 卵丘颗粒细胞的AQP9可能通过影响卵丘颗粒细胞的凋亡来影响卵母细胞 成熟，且水牛颗粒细胞凋亡过程中可能发挥重要的功能作用。AQP9可能在 PKC信号通路介导的水牛颗粒细胞凋亡过程中发挥重要的作用。 关键词：水牛AQP9颗粒细胞细胞凋亡基因表达PKC 万方数据 THE THE PRELIMINARY STUDY OF AQP9 GENE EXPRESSION AND ITS RELATl0NSHIP WITH APOPTOSIS IN BUFFAL0 GR ANULOSA CELLS ABSTRACT Aquaporins(AQPs)ale kinds of specific water-selective membrane channel proteins，which widely exist in prokaryotic and eukaryotic cell membrane．Based on studies of mice and human，it was found that，besides the function of transporting water,some of AQPs involved in the formation and development of follicles，granulosa cell apoptosis，follicular atresia and the fertility of female animal，but the mechanism Was still unclear．In present study, we first cloned the buffalo AQP9 gene，then analyzed its expression pattern in buffalo follicules and during early embryonic development process，in addition the expression of AQP9 and apoptosis-related genes in granulosa cells from buffalo follicles、析th different atretic status and oocyte cumulus cells matured in vitro．Then．we explored the relationship between the expression of AQP9 gene and the apoptosis of buffalo granu