eno1在经胶质瘤细胞系中的功能及机制-化学生物学专业毕业论文.docxVIP

目录2．2．1 目录 2．2．1 0抗生素平板筛选阳性克隆 ．20 2．2．11菌液PCR验证阳性克隆 ．20 2．2．12菌种保存 21 2．2．1 3质粒小提 ．21 2．2．1 4双酶切 ．22 2．2．1 5胶回收双酶切后目的片段 ．22 2．2．1 6靶基因与表达载体连接 ．22 2．2．1 7再次转化与扩增 ．23 2．2．1 8重组蛋白诱导表达 23 2．2．1 9重组蛋白SDS．PAGE凝胶电泳及考马斯亮蓝染色 24 2．2．20 GST标签WBP2融合蛋白纯化(实验室已构建好质粒) ．．24 2．2．21 his标签EN01融合蛋白纯化 ．24 2．2．22重组蛋白纯化检测 ．25 2．2．23细胞培养 ．25 2．2．24细胞总蛋白提取 ．25 2．2．25 GST．pull down实验 26 2．2．26银染 ．26 2．2．27质粒中提 ．27 2．2．28 DNA转染U251细胞 28 2．2．29 siRNA稀释 ．28 2．2．30 siRNA转染U251细胞 ．．28 2．2．31 G418筛选稳定转染细胞系 29 2．2．32细胞冻存 29 2．2．33细胞复苏 30 2．2．34 Western．．blot．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30 2．2．35荧光定量PCR 31 2．2．36细胞周期检测 32 2．2．37划痕检测 33 2．2．38 Transwell检测 33 2．2．39 MTT ．34 2．2．40细胞凋亡 34 2．3数据统计 ．35 万方数据 目录2．4本文的研究思路 目录 2．4本文的研究思路 ．．36 第三章结果分析与讨论 。37 3．1 Pull．down／MS发现潜在相互作用蛋白质 ．．37 3．2体外克隆、表达并纯化EN01 39 3．3 EN01能够与WBP2在体外结合及WBP2对EN01的影响 ．．41 3．4干扰EN01后对细胞增殖、迁移的影响 ．．44 3．5干扰EN01后，对细胞周期和细胞凋亡的影响 47 3．6在过表达WBP2的U251细胞中下调EN01对增殖和迁移的影响 49 3．7 EN01对神经胶质瘤细胞增殖、迁移、凋亡影响的分子机制 52 第四章总结和展望 s3 4．1总结 ．．53 4。2展望 ．．53 参考文献．．． ．55 硕士期间参与的研究项目和成果 。60 致谢 61 万方数据 ContentsTable Contents Table of contents Abstract in Chinese．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．I Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．II Chapter I Intriduction．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 I．I Bacground of Glioma ．1 1．1．1 Bacground ofGlioma． ． ． ． ． ．． ． ．． ． ．． ． ． ．．．1 1．2 Introduction of盈置P2 in tumor research ．． ． ．． ．．2 1．2．1 Background of∥BP2 ．．2 1．2．2 Research status of脚2 2 1．3 Introduction of E，、，(M 4 1．3．1 Bacground ofENOI． ． ． ．． ． ． ．．． ．． ． ．． ． ．． 。 ．． ． ．4 1．3．2 EN01 fuction and its relationship with disaases ． ． ． ．． ．． ． ． ．．．6 1．4 The purpose and significance of this research ．10 1．4．1 purpose and significance． 。 ．