二Lowry-酚试剂法蛋白质定量.PPTVIP

实验二 ?Lowry-酚试剂法测定蛋白质定量 原理 1、蛋白质＋ Cu 2+ 蛋白质-铜络合物（双缩脲试剂） 2、蛋白质-铜络合物＋磷钼酸-磷钨酸 蓝色化合物 3、蓝色∝蛋白质含量 比色分析 此法比双缩脲法测定蛋白质的方法提高100倍。 测定范围可在0.03-0.3mg/ml。波长650nm。 碱性铜试剂的制备 1、 A 液： 2％Na2CO3 （0.1mol NaOH 配制）； 2、 B 液：0.5％ CuSO4·5H2 O （ 用1％酒石酸钾钠 配制）。 在使用前将 A 液与 B 液按 50︰1 的比例混合即成。此为 Folin- 酚试剂甲液，此试剂只能使用 1 天。 酚试剂的配制： 1ml酚试剂贮存液加水至10ml. 标准蛋白液（250μg/mL） 应用血清： 取血清0.1 ml于5 0ml容量瓶中，加生理盐水至刻度，混匀备用。 实验操作： 1、标准曲线的制备：见表 2、未知样品的测定：应用血清 实验操作——标准曲线及样品的测定 0 1