cxcr4拮抗多肽抗肿瘤功效及纳米银毒理研究-生物医学工专业毕业论文.docx

北京协和医学院博士毕业论文3．2 北京协和医学院博士毕业论文 3．2 AgNPs对血管内皮细胞的毒性及机理研究 。92 3．2．1细胞对AgNPs的摄取及其在细胞中的定位 92 3．2．2 AgNPs对内皮细胞间连接和细胞骨架的影响 。94 3．2．3 AgNPs对细胞内ROS水平的影响及其与细胞间连接的相关性 95 3．3尾静脉暴露AgNPs对小鼠的毒性研究 99 3．3．1尾静脉注射AgNPs对小鼠肝、肾、肺组织的影响 99 3．3．2尾静脉注射AgNPs对补体系统的作用 106 3．3．3尾静脉注射AgNPs对小鼠血清生化指标的影响 ．107 3．3．4尾静脉注射AgNPs在小鼠肝脏组织中的定位 。109 第4章结论和展望 1 1 1 参考文献 1 1 2 附录1．非论文综述 ．1 14 附录2．研究生期间发表的论文 ．125 ji!I：谢 127 万方数据 北京协和医学院博士毕业论文第一部分 北京协和医学院博士毕业论文 第一部分 人工设计CXCR4拮抗多肽提高化疗药对肿瘤治疗功效研究 摘要 目的：乳腺癌细胞和急性髓系白血病(AML)细胞表面通常较高表达趋化因子受体 CXCR4，而其配体CXCLl2主要由肿瘤微环境和骨髓中的基质细胞或成纤维细胞分 泌。CXCLl2能激活CXCR4信号传导通路，为肿瘤细胞提供存活、增殖、粘附和 趋化等信号，从而促进肿瘤生长和肿瘤细胞向其他器官的浸润。CXCR4／CXCLl2 生物轴还可招募白血病细胞向骨髓归巢，与骨髓中的基质细胞粘附，获得生存信号 并形成微小残留病灶。上述过程为乳腺癌发生转移或白血病的复发与耐药埋下了隐 患。此外，CXCLl2还能吸引内皮祖细胞向肿瘤微环境的转移，促进血管生成，为 肿瘤的生长提供营养物质。因此阻断CXCR4／CXCLl2的相互作用可以抑制肿瘤细 胞生长、粘附和浸润行为，从而有效提高化疗药对肿瘤细胞的治疗功效。 在前期研究过程中，我们根据CXCR4结构和序列的特征设计得到了小分子多 肽E5，并在细胞和动物模型上证明了E5能有效抑制AML细胞对CXCLl2活化作 用的响应。本研究拟在细胞和乳腺癌小鼠模型及AML小鼠模型上，将E5与化疗药 联合使用，评价E5对化疗药治疗功效的作用并研究其作用机理；同时，在健康小 鼠模型上研究E5的药代动力学。 方法：以小鼠乳腺癌细胞4T1、小鼠骨髓基质细胞MS．5和人脐静脉内皮细胞HUVEC 为模型，通过流式细胞术检测E5与乳腺癌细胞的结合情况；利用细胞活性检测试 剂(CCK．8)、westernblot和AnnexinV-PI双染方法检测E5对4T1细胞的毒性；通 过transwell细胞迁移小室以及细胞共培养的方法研究E5对细胞向基质细胞迁移和 粘附的影响；用westem blot方法检测E5对CXCR4下游Akt和Erk信号通路的作 用；利用CCK．8方法检测E5联合多种化疗药对于MS．5细胞共培养的4T1细胞活 性的影响；在乳腺癌小鼠模型上，将E5与多种化疗药联合应用，对荷瘤小鼠进行 治疗，通过监测小鼠肿瘤尺寸和统计小鼠生存期来评价治疗效果。进一步通过用 western blot检测小鼠肿瘤内与CXCR4下游信号通路相关的蛋白以及与血管生成相 关蛋白的水平，探讨E5的作用机理；在AML小鼠模型上，分别在注射E5前后收 集小鼠外周血并用流式细胞术检测E5对AML细胞的动员作用。将E5与长春新碱 或环磷酰胺联合治疗，通过检测小鼠体重和生存期以及骨髓、脾脏中白血病细胞比 例评价治疗效果；对健康小鼠皮下注射FITC标记的E5，通过荧光成像和检测小鼠 血液中的荧光强度来评价E5在体内的代谢。 ．4 万方数据 北京协和医学院博士毕业论文结果：(1)E5与高表达CXCR4的4T1和HUVEC细胞均有较强的结合，而与低表 北京协和医学院博士毕业论文 结果：(1)E5与高表达CXCR4的4T1和HUVEC细胞均有较强的结合，而与低表 达CXCR4的MS．5细胞结合较弱。(2)当浓度高于25 gM时，E5能抑制4T1细胞 的活性，并诱导细胞的凋亡。(3)培养基中添加的CXCLl2可以诱导4T1和HUVEC 细胞的迁移；而使用E5对两种细胞进行处理，则可有效抑制CXCLl2诱导的细胞 迁移：此外，E5还能有效抑制由MS．5细胞制备的条件培养基所诱导的4T1细胞的 迁移和粘附。(4)E5能有效拮抗CXCR4／CXCLl2生物轴介导的信号通路，抑制 CXCR4下游Akt和Erk蛋白的磷酸化。(5)当E5分别与紫杉醇、顺铂、阿霉素、 或长春新碱联合作用于4T1细胞时，E5能提高细胞对化疗药的敏感性，有效增加 化疗药诱导的4T1细胞的死亡。(6)将E5与环磷酰胺或阿霉素联合治疗乳腺癌小 鼠时，与单纯化疗药治疗相比，E5联合化疗药能明显抑制乳腺癌