第一章酶英ppt课件.ppt

星号活性？ 合成cDNA的主要步骤： 1、应用poly(A)mRNA为模板，以12~18个碱基长的oligo(dT)片断作为引物，加入反转录酶，合成出cDNA第一链; 2、用碱水解法除去mRNA模板，单链cDNA能自我折叠形成一种发夹结构，作第二链的引物，用反转录酶或Klenow聚合酶催化第二链cDNA的合成； 3、用SＩ核酸内切酶消化除去单链区的发夹结构。 4、通过同聚物或合成的衔接物，使DNA分子克隆到适当的载体分子上。 T7DNA聚合酶： 1978年，S.Tabor从感染了T7噬菌体的大肠杆菌寄主细胞中纯化出来的一种核酸酶。 具有5’ 3’的聚合酶活性和很高的单链及双链的3’ 5’核酸外切酶活性。 T7DNA聚合酶的用途： 1、用于对大分子量模板的延伸合成； （不受DNA二级结构的影响，聚合能力较强可 延伸合成数千个核苷酸） 2、 通过延伸或取代合成法标记DNA3’末端 3、 将双链DNA的5’或3’突出末端转变成平末 端的结构。 修饰的T7DNA聚合酶 对天然的T7DNA聚合酶进行修饰，使之完全失去3’ 5’的外切酶活性。聚合作用的速率增加了3倍。 用途：