egcg单药及联合tsa逆转人性淋巴瘤ca46细胞系p16基因甲基化状态及转录激活的实验研究-内科学(血液病)专业毕业论文.docxVIP

EGCG单药及联合TSA逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系 EGCG单药及联合TSA逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系 p16基因甲基化状态及转录激活的实验研究 研 究 生：喻爱芳 导 师：沈建箴 教授 陈志哲 教授 中文摘要 目的 应用巢式甲基特异性PCR法(nested methylation specific PCR， nMSP)和DNA克隆测序检测人恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因的甲基化状态；探讨 EGCG单药及EGCG联合TSA逆转CA46细胞株p16基因甲基化状态及调节转录作用的 可能机制。方法采用MTT法检测EGCG单药及EGCG联合TSA对人恶性淋巴瘤CA46 细胞系增殖、活力的影响；采用nMSP和DNA克隆测序法检测药物作用前后p16基因 甲基化状态变化；RT—PCR法检测p16、甲基转移酶DNMTl、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA 的表达；利用流式细胞仪DNA倍体分析法探讨EGCG单药及EGCG联合TSA对人恶性淋 巴瘤CA46细胞周期的影响。结果 1．与对照组相比，EGCG单药及联合TSA均能明 显抑SUCA46细胞生长，G。／G。期细胞比例增加，以联合用药组增加尤为明显； 2．CA46细胞存在p16基因异常高甲基化，EGCG单药及联合TSA作用48h后p16基因甲 基化程度明显减弱，p16基因异常甲基化的状态被逆转； 3．未处理组CA46细胞 p16基因在mRNA水平呈微弱表达， EGCG单药组随药物浓度增力Hpl6基因mRNA表达 逐渐增强，呈剂量依赖性，各组间比较差异有统计学意义伊饱刎，联合用药 组与EGCGl2 u g／ml组相比较，p16基因mRNA表达增高；4．与未处理组相比，EGCG 单药及联合TSA作用48h后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降，而DNMTl表达 不受影响。结论1．EGCG可能通过抑制甲基转移酶甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B 活性逆转p16基因甲基化状态，实现其细胞周期调控功能，将细胞阻滞于G。／G。 2 期，抑$0CA46细胞的增殖。 期，抑$0CA46细胞的增殖。 2．TSA可能通过改变染色质结构，增强EGCG的去甲 基化作用。 关键词 甲基化p16 EGCG TSA恶性淋巴瘤CA46甲基转移酶巢式MSP Experimental Experimental study on EGCG alone or in combination with TSA reversing hypermethylation of p16 and activating its transcription in malignant lymphoma cell line CA46 Postgraduate：Yu Ai-fang Tutor：Prof．Shen Jian．zhen Prof． Chen Zhi．zhe Abstract objective To measure methylation level of gene p1 6 in the malignant lymphoma cell line—CA46 by DNA sequencing and Modified Methylation Specific PCR(MSP)，i．e． Nested Methylation Specific PCR(nMSP)；and to investigate the mechanism that how Epigallocatechin-3一gallate(EGCG)alone or in combination wim Trichostatin A (TSA)would reverse hypermethylation ofp l 6 and exert its function of transcription regulation in the malignant lYmphoma cell line一一CA46．Methods The CA46 cell line were cultured in exposure to varied doses of EGCG and TSA，and th cell viability Was obtained by the MTT assay；Both methylation levels of CA46 before and after EGCG alone or in combination with TSA disposal were analyzed by nMSP；The expression of p1 6，DNA methyltransferase 1(DNMTl)，DNMT3A and DNMT3B