ebvmirbhrf11通过抑制p53调节鼻咽癌细胞中ebv感染态的分子机制研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 内，BART组则位于病毒潜伏期转录产物BART内。BART组miRNA 已证实可以抑制病毒复制，维持其较低的复制水平。BHRFl组在病 毒裂解复制水平增高时表达增加，提示其与病毒裂解复制的调控相 关。但是，生物信息学分析并没有发现BHRFl组miRNA在病毒裂 解复制期基因中存在作用位点，只有ebv．miR．BHRFl．1在人p53 mRNA 3’．非编码区(3’．UTR，3-Untranslated regions)存在两个作用 靶位点。 P53是重要的抑癌基因，在多种肿瘤中存在突变。但是，在鼻咽 癌中p53基因的突变频率很低(10％)，并出现了p53蛋白积聚现象。 作为调节细胞周期进程和细胞凋亡的重要基因，多数病毒在宿主细胞 内进行自身复制时，需要通过不同的途径来抑制p53的功能，来使宿 主细胞内环境处于类S期，并抑制细胞的凋亡，为病毒自身复制提供 原料和赢得时间。而且研究发现，EB病毒裂解复制立刻早期基因蛋 白Zta，作为病毒裂解复制的开关基因，在病毒进入裂解复制周期时 可以和p53结合，抑制其转录激活功能。说明EB病毒在复制过程中 同样需要抑制p53的功能以为其自身复制提供有利条件。那么野生型 p53蛋白在鼻咽癌中的积聚，可能在鼻咽癌中EB病毒低水平复制的 维持中具有重要意义。 由此，我们推测：EBV编码的ebv．miR．BHRFl．1可能通过调节 宿主细胞相关基因p53的表达，进而调节p53与Zta相互作用而参 与调节EBV潜伏与裂解两种状态的转换。 Il 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 我们采用TPA诱导SUNEl内病毒裂解复制水平增高后，采用 RT-PCR方法证实在病毒裂解复制水平增高后，ebv—miR-BHRFl．1的 表达也随之上调，而p53蛋白水平和下游基因mdm2水平随之下调， 同时细胞周期检测证实S期细胞增加而凋亡细胞减少， ebv．miR-BHRFl．1的上调与p53的下调及功能受抑有利于病毒复制， 且两者之间存在联系。 然后，我们采用反义RNA特异性抑制ebv．miR-BRHRFl．1之后， 再以TPA处理SUNEl，发现病毒裂解复制早期蛋白Zta和Ea．D上调 幅度减小，说明裂解复制水平提高的幅度减小，而p53蛋白水平和 mdm2水平的下调也减弱，mdm2水平甚至得到逆转，说明p53功能 的受抑制程度也得到了逆转。 接下来，我们构建ebv．miR．BHRFl．1的过表达载体，转染SUNEl 细胞，观察GFP蛋白表达证实转染效率，以RT-PCR检测证实成熟 ebv．miR-BHRFl．1得到表达，再检测病毒复制早期蛋白Zta和Ea．D 水平以及p53蛋白和mdm2蛋白水平，比较对病毒复制水平的影响和 对p53的抑制作用。发现在过表达ebv．miR-BHRFl．1后，病毒裂解 复制水平提高而p53蛋白水平和功能受到了抑制。 以上研究结果表明， EB病毒编码的miR-BHRFl．1通过调节宿 主细胞相关基因p53的表达参与病毒裂解复制的调节，初步阐明EBV 编码的miR．BHRFl．1参与调节EBV两种感染状态的平衡以及维持 EBV的持续存在中的作用机制。为EBV相关肿瘤的发生机制提供 III 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 新的理论依据，并为以EBV编码的miRNAs为切入点治疗EBV相 关肿瘤的实验研究提供新的理论和实验依据。 关键词EBV、miR-BHR 1．1、鼻咽癌、p53、裂解复制 IV ABSTRACTmiRNAs(microRNAs)constitute ABSTRACT miRNAs(microRNAs)constitute a large family of approximately 22··nucleotide—long non·-coding small RNAs that have been found in recent years．miRNAs have been known as key post—transcriptional regulators of gene expression through translational repression or mRNA degradation in metazoans and plants．HoweveL the mechanistic details of the functions of miRNAs in protein synthesis repression ar e still poorly understood．miRNAs have been found to located from virus to