cxgjic对大鼠内肝卵圆细胞的调控及机制.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 ■r■^掌 ■r■^掌t掌l*±掌t性·文 CX／GJIC对大—：俸内肝舅·田l胞的调拉a机●¨ HSC Hematopoietic stem cells 骨髓造血干细胞 IL／DT ncisior：I Ioading／dye transfer 切开标记／染料 示踪技术 LY Lucifer Ye|lOW 荧光黄染料 LPS LipOpOlysaccharide 内毒素(脂多糖) MAPK Mitogen—activated protein kinase 分裂原激活的蛋 白激酶 mRNA Messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 NC Nitro cellulose membrane 硝酸纤维膜 NPCs Neural progenitor cells 神经干细胞 0D Optical density 光密度 PB PhenObarb．taI 苯巴比妥 PBS Phosphate buffer saline 磷酸盐缓冲液 PH partial hepatectomy 部分肝切除术 PNS Panax notoginseng saponins 三七总皂甙 RHD Rhodamine 罗丹明 RT．PCR Reverse transcription—polymerase 逆转录聚合酶链 chain reaction 反应 SAPK Stress activated protein kinase 应激激活的蛋白 激酶 Ser Serine 丝氨酸 Thr Thernonine 苏氨酸 第3页共117页 南■ 南■夫#t掌’t1嘻女#m{￡?^ Cx／GJIC对大量体内肝，P硼，-胞的调控A机，M CX／GJ l C对大鼠体内肝卵圆细胞的调控及机制 博士生：李学东 导师：傅华群教授 摘 要 研究背景 烧伤后肝功能障碍颇为常见，肝功能损害的程度与烧伤严重程度相关。 肝再生是肝损伤后存活肝细胞增殖修复重建损伤肝脏的一个重要病理过程。 但是在肝细胞增殖能力受损时，肝干细胞成为重建肝脏的主要细胞来源，肝 干细胞以其高增殖双向分化潜能，在肝损伤重建过程中展示了诱人的前景。 随着干细胞研究的兴起，人们发现肝干细胞与肝脏肿瘤发生关系也非常密切， 因此对于肝干细胞研究的首要任务是阐明其调控机制。 缝隙连接蛋白(Connexin，CX)介导的缝隙连接细胞问通讯(gap junction interce]lular communication，GJIC)是细胞问最重要的信息交流形式，调 节组织的损伤及修复过程。与生长、分化密切相关的小分子物质(1000Da) 可以通过GJ从一个细胞至另一个细胞，从而影响组织细胞的生长、增殖、分 化和凋亡等重要生物学过程。最新研究表明干细胞增殖、分化与cX的表达密 切关联，受Cx及其介导的GJlC影响。因此，CX／GAIC可能是干细胞增殖、分化 过程中的关键靶点。 卵圆细胞(hepatic oval cells，HOC)是肝干细胞的子代细胞，目前对 肝干细胞的调控研究多针对于HOC，大多探讨细胞因子的影响。现已证实IiOC 表达CX43蛋白，但是CX／GJIC对HOC增殖、分化的调控作用如何?其机制如何? 目前所知甚少。 为探讨上述问题，本课题通过建立大鼠IIOC增殖动物模型，从以下几个 层次逐步深入的对上述问题进行研究： 第一部分大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏的CX／GJIC表达 目的：研究大鼠朋：卵圆细胞增殖模型肝脏CX／GJIC的表达规律。 方法：雄1眭Wistar大鼠36只，随机分成Control组(n=6)和2 AAF／PH组(n-30)。 第4页菇117页 _■^$E掌院博 _■^$E掌院博±掌t《}i cx／GJic目^14_内*#Ⅷ自m∞q#a“M 2-AAF／PH组按改良Solt—Farber法建模：2-kAF每日按20rag／kg剂量灌喂，连续4 天，第5日不灌喂，行2／3肝切除，术后次日按20mg／kg／d齐lj量继续灌喂5日。 术后2一AAF／PH组随机在4h、4d、8d、12d、16d／}H应的时间点取材(n=6)，Control 组作正常对照。采用组织病理技术观察肝组织的形态学变化、免疫组化方法 计数HOC及CX32、CX43的定位分布，IL／DT技术分析GJIC，蛋白印迹检测Cx43 的水平，RT—PCR检钡IJCX32、CX43的mRNA表达。 结果： HOC的增殖特点：Control组未见增生反应。2-AAF／PH组在肝切后4h无 明显增殖反应；4d汇管区有增生反应，8d至高峰、12d向肝实质内穿插生长 的HOC已连接成片、16d明显减少，增生细胞体积较小、细胞核呈卵圆形、胞 质较少(为肝细胞的1／3～1／5)、核／浆比例较