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连接产物的转化 1、puc19质粒用HindIII和EcoRI酶切，线性化； 2、目的片段用HindIII和EcoRI酶切，线性化； 3、回收酶切后的质粒和目的片段，定量,连接； 一 实验目的 掌握细菌转化的一般技术和原理。 二 实验原理 在基因克隆技术中，转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。使受体细菌从周围介质中吸收外来DNA分子，从而获得新的遗传物质的过程就是转化。 通常所用的受体是大肠杆菌。 用于转化的细菌被称为感受态细胞。 所谓的感受态，即指受体（或者宿主）最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。细胞的感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。 Ca2+处理的感受态细胞，其转化率一般能达到5x106~2x107 转化子/ug质粒DNA，可以满足一般的基因克隆实验。如在Ca2+ 的基础上，联合其它的二价金属离子（如Mn2+ 、Co2+ ）、DMSO或还原剂等物质处理细菌，则可使转化率提高100~1000倍。 大肠杆菌的转化常用热激法，该法最先是由