ev71ca16联合灭活疫苗免疫保护效研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文1 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文 1 细胞活性检测 48 2 CAl6灭活疫苗免疫后小鼠免疫细胞亚群的流式分析 ．48 3 小鼠脾脏单个核细胞回输结果 49 4 小鼠CD3￡+T淋巴细胞回输结果 49 5 小鼠B淋巴细胞回输结果 ．．50 6 CD4+和CD8+T淋巴细胞回输结果 ．50 7 记忆性T细胞、效应性T细胞的流式分选及回输结果 ．．50 四、j寸论 51 五、 小结 52 参考文献 。S3 附录 ．．58 致谢 ．．59 个人简历 ．．61 独创性声明 62 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文摘要 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文 摘要 目的：利用肠道病毒71型．柯萨奇病毒A组16型(EV71．CAl6)联合灭活疫苗， 对动物体内和体外的保护效果进行研究。尝试用致敏的T淋巴细胞通过腹腔过继回 输的方法建立过继免疫乳鼠模型，对细胞免疫反应与保护作用之间的关系进行探索 性研究。方法：用Vero细胞培养疫苗候选株EV71．KM和CAl6．KM，病毒收获后 经B．丙内酯灭活，AI(OH)3佐剂吸附，制成实验性疫苗。实验性疫苗分别于第0和 14天经肌肉注射免疫8周龄ICR雌鼠，looul／只，联合免疫组免疫剂量分为：EV71 256EU+CAl6 32EU组、EV71 256EU+CAl6 320EU组与EV71 256EU+CAl6 960EU 组，对照组注射等体积PBS，第一次免疫后1h与雄鼠合笼，随其交配，分娩后24h 内采集母鼠和乳鼠的血液用于血清中和抗体滴度的检测；同时用100LDso强毒株 (EV71．CC，CAl6。CC)经颅内注射进行攻毒，连续21天观察其临床症状与死亡 情况，评价联合疫苗对乳鼠的保护作用。用CAl6．KM灭活疫苗(抗原含量为 32EU／100p1)经腹腔注射免疫1日龄SPF级ICR乳鼠2次，间隔2周，40ul／只，对 照组注射等体积PBS，末次免疫后第7天，以安乐法处死小鼠，无菌条件下取出脾 脏，分选脾脏单个核细胞、T细胞、B细胞、记忆性T细胞、效应性T细胞，将分 选的细胞经腹腔注射回输1日龄乳鼠，回输2h后用强毒株(CAl6。CC)经颅内注 射攻击，连续21天观察其临床症状与死亡情况，评价细胞免疫反应与保护作用之 间的关系。结果：各实验组未检测到血清特异性中和抗体；EV71．KM灭活疫苗和 CAl6．KM灭活疫苗之间没有交叉保护作用。两种疫苗单独免疫雌鼠能够完全保护 其新生乳鼠抵抗相应病毒致死剂量的攻击；联合免疫时，EV71 256EU+CAl6 32EU 剂量组，对EV71的保护率为100％，对CAl6的保护率及EV71和CAl6同时攻毒 的保护率为0％； CAl6免疫剂量提高到320EU时，对EV71和CAl6同时攻毒总 的保护率为30％：对EV71的保护率为100％，对CAl6保护率为67％。CAl6免疫 剂量提高到960EU时，对两个病毒同时攻击的保护率为70％，对EV71和CAl6分 别攻击的保护率均达到100％，，对照组的保护率为O％。CAl6灭活疫苗免疫组小鼠 脾脏单个核细胞以2×107／只回输ICR乳鼠，对CAl6攻击产生100％的保护；免疫 组T细胞以1×107／只回输ICR乳鼠，对CAl6攻击产生60％的保护；免疫组B细胞 以1×107／只回输ICR乳鼠，对CAl6的攻击产生56％的保护；免疫组CD4+T和CD8+T 细胞以5．0×106／只回输裸乳鼠、免疫组记忆性T细胞、效应性T细胞以2．0×105／只 回输裸乳鼠后对病毒攻击均无保护，对照组对病毒攻击均无保护。结论：EV71．CAl6 联合免疫动物可诱导产生针对两种病毒的免疫反应。EV71 256EU在与三个CAl6 不同配比剂量组中均可产生完全保护；CAl6低剂量组没有有保护作用，提高剂量 后，保护率也提高。致敏的脾脏单个核细胞过继回输至新生乳鼠体内可完全保护其 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文抵抗 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文 抵抗CAl6的攻击。致敏的T细胞、B细胞过继回输至新生乳鼠体内可在一定程度 上部分保护其抵抗CAl6的攻击。 关键词：EV71．CAl6联合灭活疫苗；保护效果；乳鼠；过继回输；细胞免疫 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文Abstract 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文 Abstract Objective：To prepare the EV7 1-CAl6 bivalent inactivated vaccine and evaluate its protective effic