红景天苷调控大鼠颅骨成骨细胞表型表达及相关机制的研究-口腔临床医学专业论文.docxVIP

独 创 性 说 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解河北联合大学有关保留 、使用学位论文的规定， 即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文 ，学校有权保 留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论 文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检 索和交流。 作者及导师同意论文公开及网上交流的时间： □ 自授予学位之日起； □ 自 年 月 日起 作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 摘 要 摘 要 目的 通过多次酶消化的方式获取新生 24 小时大鼠颅骨成骨细胞（rat calvarial osteoblasts, ROB），并以其为研究模型，观察常氧条件下不同浓度的红景天苷 （salidroside, SAL）对成骨细胞增殖、分化和矿化的调控作用，并对其可能的作用 机制进行了初步探讨，同时还观察了 SAL 对成骨细胞低氧诱导因子-1α（hypoxia- inducible factor-1 alpha, HIF-1α ） 及其 下游靶 基 因血 管内 皮生 长因 子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）的调控作用。 方法 1 利用酶消化的方式获取 ROB 细胞，通过差速贴壁法纯化 ROB 细胞，经 过活细胞形态学的观察、碱性磷酸酶 Gomori 钙-钴法染色及矿化结节茜素红染色法 来鉴定 ROB 细胞，取第三代纯化度达 90%以上者用于实验。2 利用 MTS 法检测 ROB 细 胞 的 增 殖 活 性 。 3 利 用 磷 酸 苯 二 钠 法 ， 使 用 碱 性 磷 酸 酶 （ alkaline phosphatase, ALP）试剂盒测定 SAL 对成骨细胞早期分化的标志性基因 ALP 活性 的影响。4 利用反转录 聚合酶链 式反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）法检测成骨细胞晚期分化的标志性基因骨钙素（osteocalcin, OC）、成骨细胞特异性转录因子 Osterix（Osx）和 Runx2 及 HIF-1α、VEGF 的 mRNA 表达水平。5 利用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immnosorbent assay, ELISA） 测 定 OC 、 VEGF 及 成 骨 细 胞 早 、 中 期 分 化 的 标 志 性 基 因 I 型 胶 原 （Collagen Type 1, Col-1）的分泌水平。6 利用茜素红染色和定量分析法检测 SAL 对 ROB 矿化功能的影响。 结果 1 获取的 ROB 细胞经 Gomori 钙-钴法染色后胞质内有灰黑色的颗粒及块状 沉淀出现。ROB 细胞经不传代培养 13 天可形成矿化结节，在倒置显微镜下观察呈 黑色不透明区，其经茜素红染色后呈现红色。2 SAL 可显著促进 ROB 细胞增殖。 3 SAL 能显著增加 ROB 细胞中 ALP、Col-1 及 OC 的含量促进细胞分化成熟。 4 SAL 能够促进 ROB 细胞矿化形成矿化结节。5 SAL 能显著促进成骨细胞分化的 特异性转录因子 Oterix 和 Runx2 的 mRNA 转录水平增高。6 SAL 能上调 HIF-1α 及 其下游靶基因 VEGF 的表达。 结论 SAL 可以促进 ROB 细胞增殖、分化及矿化；上述作用可能与 SAL 上调成 骨细胞特异性转录因子 Oterix 和 Runx2 的 mRNA 转录水平及激活 HIF-1α 和 VEGF 相关。 - I - 河北联合大学硕士学位论文 图 16 幅；表 9 个；参 41 篇。 关键词：红景天苷；大鼠颅骨成骨细胞；低氧诱导因子；增殖；分化；矿化； 成骨细胞特异性转录因子 分类号：R782 - II - 摘 要 Abstract Objectives The neonatal rat calvarial osteoblasts(ROB) obtained by the repeated enzymatic digestion method. Under the normoxic condition, we observed the regulation of t