miRNA134抑制非细胞肺癌增殖 迁移及侵袭的机制研究.docx

山东大学博士学位论文 CONTENTS Abstract in Chinese 1 Abstract in English ．7 Abbreviations ．13 Introduction ．15 Part 1．Identify miRNAs that target EGFR directly 18 Materials and methods ．1 8 Results ．．30 Discussion ．．3 1 Conclusion ．33 Figures ．34 Part 2．miR-1 34 inhibits NSCLC cells proliferation and migration as well as invasion in vitro 40 Materials and methods ．40 Results ．．45 Discussion ．．48 Conclusion ．50 Figures 一5 1 Part 3．miR一1 34 suppresses NSCLC growth and metastasis in vivo 67 Materials and methods ．67 Results ．．69 Discussion 一70 Conclusion ．72 Figures 一73 References 77 Acknowledgement ．．83 List ofpublished articles ．．84 English manuscripts 85 万方数据  山东大学博士学位论文 miRNA．134抑制!IIEd,细胞肺癌增殖、迁移及侵袭的机制研??? 博士生：秦琴 导师：李宝生研究员 专业：肿瘤学 中文摘要 肺癌是我国发病率和死亡率均最高的恶性肿瘤。非小细胞肺癌(non．small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌的80％．85％，目前主要治疗手段包括手术治 疗、化学治疗、放射治疗及靶向治疗。尽管治疗方式众多，肺癌的5年生存率仍 不足l 7％，多数病人最终死于远处转移。研究NSCLC发生发展的分子机制将有 助于找寻更好的治疗靶点，从而设计更好的靶向治疗药物。 表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)是l型酪氨酸 激酶ErbB家族成员之一，该家族成员还包括ErbB2／Her2、Her3和Her4。EGFR 的过表达及异常活化参与多种上皮恶性肿瘤的发生发展过程，NSCLC中亦常出 现EGFR过表达或是酪氨酸激酶的活化突变。早在1983年就有学者提出针对 EGFR的靶向治疗，目前靶向EGFR的治疗已经成功应用于临床，其主要方式有 两种：一是针对EGFR的单克隆抗体，如西妥昔单抗；一是针对EGFR酪氨酸 激酶活化突变的抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitors，TKIs)，如吉非替尼、厄洛替 尼等。尽管单克隆抗体和TKIs(特别是TKIs)在部分NSCLC病人中疗效显著， 但几乎所有病人最终出现耐药。如何解决EGFR靶向治疗的原发性及继发性耐药 问题仍是靶向治疗中的难题。 microRNAs(miRNAs)是一类非编码的小分子RNA，长度约在22个核苷 酸左右。miRNAs普遍存在于动植物细胞内，是基因表达和调控的转录后修饰途 径，主要通过作用于靶基因mRNA的3’UTR端而发挥调节作用。据估计，哺乳 动物中有超过50％的基因受miRNAs的调控。miRNAs参与细胞生命过程中几乎 所有的重要进程，包括细胞增殖与分化、细胞周期调控、细胞死亡与凋亡、细胞 迁移和侵袭等。miRNAs表达失调参与多种疾病包括肿瘤的发生与发展，几乎所 有肿瘤中均能检测到miRNAs的异常表达，这些异常表达的miRNAs在肿瘤中 发挥着癌基因或是抑癌基因的作用。近来研究显示，基于miRNAs的靶向治疗可 1 万方数据  山东大学博士学位论文 能是一种有效可行的靶向EGFR的治疗手段。目前已知多种miRNAs(如 miRNA．7，miRNA．23b／27b和miRNA．133a等)能直接靶向EGFR，然而，更多 靶向EGFR的miRNAs有待发现。 本研究首先通过靶基因预测软件找寻可能直接靶向EGFR的miRNAs，并从 保守的miRNAs中挑选了mirSVR评分靠前的3个miRNAs，在NSCLC细胞系 中进行进一步验证，新发现一个能直接靶向EGFR的miRNA，miRNA．134 (miR．134)；随后对miR．134在NSCLC中的抑癌作用及其机制进行了深入研究， 证实miR．134可能作为NSCLC治疗的新的研究靶点。 第—部分鉴定直接靶向EGFR的miRNAs 【目的】 通过靶基因预测软件找寻直接靶向EGFR但尚