miR145通过调节单核巨噬细胞增殖凋亡平衡参与调慢性炎症过程.docxVIP

复量大学{毒圭学位论文 中文摘要 第一部分 miR-145调控单核巨噬细胞的增殖和凋亡 目的：研究miR-145对单核巨噬细胞增殖和凋亡的调控作用。 方法：THP-1和HEK 293细胞分别转染了miR-145前体和抑制剂后， 运用XTT、细胞生长曲线的方法检测细胞增殖活力，运用TUNEL 染色、Bax染色检测细胞凋亡情况。分离OPG基因剔除小鼠骨髓 单个核细胞，转染miR一145前体或抑制剂，运用XTT、 Annexin V／PI染色检测细胞增殖和凋亡情况，以Western blotting检测过表达或抑$1]miR一145后细胞糙(cyclin B1、 cyclin D3、CDK4)和凋亡相关蛋白(Bax、caspase一9、 caspase-3、Bcl一2、PARP)的变化。 结果：细胞转染miR-145前体后，细胞增殖活力下降，增殖受抑制， 而细胞凋亡明显增加。而内源。隆miR-145受抑制后，细胞增殖 活力增加，凋亡明显受抑制。 结论：miR一145参与调控单核巨噬细胞的增殖和凋亡。 【关键词】miR一145；单核巨噬细胞；增殖???凋亡 中图分类号：R587．1  复虽大学博士学位论文 第二部分 miR-145参与调控代谢性炎症过程 目的：明确miR-145在糖尿病代谢性炎症过程中的作用。 方法：C57BL／6Jd,鼠颈静脉插管后随机分为三组，连续三天分别注射 PBS、miR一145抑制剂寡核瞢酸(ASO)和miR-145成熟序列。三 天后处死小鼠，XTT法检测小鼠骨髓单个核细胞增殖活力，肝 脏组织切片F4／80、PCNA染色。ELISA法检测小鼠肝脏组织炎症 因子表达，细胞因子抗体芯片筛查各组小鼠差异表达的细胞因 子。 结果：注射miR一145 ASO组小鼠骨髓单个核细胞增殖活力明显增加， 肝脏组织内大量巨噬细胞浸润，细胞PCNA染色阳性。小鼠肝脏 组织TN卜疆、MCP—l表达明显丹高，小鼠血清多种细胞因子表 达上调，而注射miR-145组较对照组没有明显改变。 结论：miR一145通过调控单核巨噬细胞增殖和凋亡的平衡参与代谢性 炎症过程 【关键词】miR一145：ASO；单核巨噬细胞：代谢性炎症 中图分类号：R587．1  复旦大学博士学位论文 第三部分 miR-145在人群中表达的研究 目的：研究miR-145在糖尿病、糖耐量受损(IGT)和正常人群中表达 情况。 方法：社区筛选新发糖尿病患者、IGT患者，选取性别年龄匹配的正 常人群做对照。分离外周血单个核细胞，用实时半定量PCR的 方法检钡lJmiR一145的表达，用ELISA的方法检测各组人群血清骨 保护素(OPG)的水平，进行相关性分析。 结果：与正常人群和IGT患者相比，糖尿病患者外周血单个核细胞 miR-145表达明显下调，而血清OPG水平明显升高，这两者存在 负相关的关系。IGT患者外周血单个核细胞miR一145表达水平、 血清OPG水平与正常人群相比没有明显差异。 结论：糖尿病人群miR-145表达下调，且与上调的OPG负相关。 【关键词】miR一145；OPG；糖尿病；外周血单个核细胞 中图分类号：R587．1  复虽大学博士学位论文 英文摘要 Part I miR-145 modulates monocyte-macrophage proliferation and apoptosis Objective：To evaluate the role of miR-1 45 in monocyte—macrophage proliferation and apoptosis。 Methods：After trusteed with miR-1 45 precursor or inhibitor,cell proliferation was assessed by XW and growth curve。For apoptosis assay， we performed TUNEL assay and immunofluorescence．Then we isolated bone marrow mononuclear cell from OPG knock-out mice，and evaluated the role ofmiR-145 in cell proliferation and apoptosis using X订and Annexin V／PI assay．Lastly,we studied the effects of miR-1 45 on cell proliferation and apoptosis associated proteins。 Results：Inhibition of miR-1 45