实验八 微生物生理生化特性检测(糖发酵、氨化作用、IMVC、硫化氢试验等).pptVIP

实验八 微生物生理生化特性检测 一 糖发酵试验 1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤 二 好气氨化作用试验 1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤 三 IMVC试验及H2S试验 1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 操作步骤 * * 本次实验内容（3人1组） 一 糖发酵试验 二 好气菌的氨化作用试验 三 IMVC试验 1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤 了解糖发酵的原理。 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物接种技术 不同细菌对糖的分解利用能力存在较大差异，且产物不同，是常用的鉴别微生物的生化方法。有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体；有些细菌只产酸不产气。若产酸，可根据培养基特定的酸碱指示剂的特征性的颜色变化检测；若产气，可从培养基中的杜氏小管中是否有气泡观测。 培养基—— 无菌葡萄糖发酵液体培养基 无菌蔗糖发酵液体培养基 无菌乳糖发酵液体培养基 菌种—— 大肠杆菌 枯草杆菌 在试管外壁标明发酵培养基名称和接种细菌菌名。 取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草 杆菌，第三支不接做对照； 取蔗糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草 杆菌，第三支不接做对照； 取乳糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草杆 菌，第三支不接做对照。 将接种的和做对照的9支试管放置28~30℃培养2~3天。 观察各试管颜色变化及杜氏小管中是否有气泡。 注：记录生长情况用符号表示：　　 —：不生长； +：生长差； ++：生长一般； +++：生长良好 表1 糖发酵试验结果 产酸、产气 对照 产气 产酸 枯草杆菌 产气 产酸 大肠杆菌 蔗糖 乳糖 葡萄糖 供试糖 试验菌种 发酵特性 1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤 了解好气氨化作用的原理。 掌握通过氨化作用鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物的接种技术。 不同微生物对含氮有机物分解能力及代谢途径、最终产物不尽相同，这些特征性生化反应可作为菌种鉴定的重要依据。微生物可分解含氮有机物，最终产生氨气。以酸碱指示剂试纸检测。 培养基—— 牛肉膏蛋白胨液体培养基 菌种—— 土壤颗粒 大肠杆菌 枯草杆菌 （1）取牛肉膏蛋白胨液体培养基四支，贴好标签，分别接种 土壤颗粒、大肠杆菌、枯草杆菌，余下一支不接种作为 空白对照，在每支试管口悬挂一条经无菌水湿润的红色 石蕊试纸，并加好试管塞。 （2）将已经接种的培养管置于28--30℃培养5--7日。 （3）结果检测： 　 观察各管红色石蕊试纸变色及培养液浑浊情况。 表2 好气菌的氨化作用试验结果 红色石蕊试纸变色程度 培养液 浑浊程度 空白对照 枯草杆菌 大肠杆菌 土壤颗粒 接种 菌样 检测项目 1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤 学习掌握IMVIC试验原理。 学习硫化氢试验检测细菌产生硫化氢的原理和方法。 学习掌握IMVIC试验及H2S试验在肠道菌鉴定中的方法及意 义。 IMVC是吲哚（indol）、甲基红（methyl red test）、伏—普（Voges-Prokauer test）和柠檬酸盐（citrate test）四个实验的缩写，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水细菌学检查。H2S试验也用于肠道菌鉴定。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中超过一定数量，则表示受粪便污染，产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分开。 检测吲哚的产生。 某些细菌可产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚（红色）。 红色者为吲哚试验阳性。 吲哚试验 检测分解葡萄糖产生有机酸如甲酸、乙酸、乳酸等（混合酸发酵）。 细菌分解葡萄糖产生混合酸，pH下降明显呈较强酸性。用甲基红指示剂检测。 甲基红指示剂：橘黄（pH6.3） 红色（pH4.2） 红色者为甲基红反试验阳性。 甲基红试验 检测某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。 例如丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，