基于pvp和pdmaema的聚阳离子结构对dna递送性能的影响-化学工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 摘 要 基因治疗在治愈遗传性疾病和获得性疾病方面具有重要的应用价值，其原理 是把功能性基因递送到靶细胞产生治疗性蛋白或沉默致病性蛋白达到治疗疾病 的目的。生物安全性好和转染效率高的基因载体是基因治疗获得临床应用的关 键。基因载体分为病毒载体和非病毒载体，聚阳离子作为一类重要的非病毒载体 能有效负载和递送基因至细胞内特定的部位。其中，聚甲基丙烯酸 N，N-二甲氨 基乙酯(PDMAEMA)是聚阳离子基因载体研究的优良模型。众多研究集中于 PDMAEMA 的不同结构对递送 DNA 性能的影响，例如接枝和嵌段共聚物被广泛 研究。但将两者进行对比性、系统性研究却少有报导。 本论文采用具有基因协同递送作用的 PVP 作为起始链段，通过可逆加成-断 裂链转移自由基聚合（RAFT）和原子转移自由基聚合（ATRP）两种可控的自由 基聚合法制备了基于 PVP 和 PDMAEMA 的组成相同的接枝和嵌段两种结构的聚 合物。研究表明接枝聚合物（PgP）能更有效地压缩 pDNA，形成的纳米粒比嵌 段聚合物（PbP）与 pDNA 形成的纳米粒更紧实、更稳定而且表面电荷更高。在 低的 N/P 条件下，PgP 在 HepG2 细胞上的体外细胞转染效率不仅比 PbP 高而且 明显 高 于 通 用 转 染 试 剂 （ Lipofectamine 2000 ） 和 聚 阳 离 子 转 染 界的 金标准 （b-PEI）。进一步比较了 PgP、PbP 和 PEI 对蛋白的吸附能力，结果表明，PgP 和 PbP 的蛋白吸附量均低于 PEI。MTT 实验结果表明 PgP 和 PbP 均具良好的生 物相容性。细胞摄取实验结果表明 HepG2 细胞对 PgP/pDNA 二元复合物的摄取 量多于 PbP/pDNA。激光共聚焦结果表明，PgP/pDNA 二元复合物的内涵体逃逸 能力强于 PbP/pDNA 二元复合物。 关键词：基因治疗；结构与性质；转染效率；内涵体逃逸；聚阳离子 ABSTRACT Gene therapy has attracted much attention for its promising application in the treatment of inherited and acquired diseases. The principle of gene therapy is that therapeutic genes are delivered into patient’s host cells to produce or silence functional proteins to cure diseases. The key factor for successful application in gene therapy is gene vector with high transfection efficiency and low cytotoxicity. Gene vectors can be divided into non-viral vectors and viral vectors. Polycations as an important kind of non-viral vectors can load genes effectively and deliver genes into cells. Among those polycations, PDMAEMA has been widedly used as a model for polycation research. Most studies concentrated on the influences of different PDMAEMA structures such as graft and block structures on their abilities of gene delivery. However，the characteristics of graft copolymer and block copolymer in gene compaction, polyplexes stability, cytotoxicity, transfection efficiency, internalization and intracellular distribution of polyplexes were few systematically investigated. In this work, PgP and PbP with equal PDMAEMA segments and