水稻抗稻瘟病细胞突变体筛选技术体系建立及其在品种改良上应用木.pdfVIP

一 f7 中国农业科学 1992，25(5)：50-57 SeientiaAttricultara Sinica 水稻抗稻瘟病细胞突变体筛选技术体系 的建立及其在品种改 良上的应用木 陈启锋 陈 璋 王金陵 — — _ _ — - 一 _ 一 福建袁学院怍物遗传育种研究所’福州35000。 5fIIlf口；、 提要 本文研究了根冠细胞法测定稆瘟病菌粗毒素 的致病性及其商体筛选水稻抗稻瘟 病细胞突变体，结果表明，致病毒素对水稻根冠细胞死亡宰的影响，不 同小种之闸差异达 显著或极显著水平 外源激素和外檀体基 因型是影响水稻成熟胚商体培养力高低的两十主 要 因素。抗稆瘟病细胞突变体 的筛选效率 以全程筛选法优干继代筛选法。建立 了一十斩的 筛选体系，它不仅简单异行，而且可 以避尧丧失惫伤组织的形卷发生能力，再生檀株育性 较好，井应用于水稻改 良，获得了一批抗稆瘟病株系。同时对如何完善试验研究的有关问 题进行 了讨论。 ． ， ． 关键词 =苎塑；跫苎苎；堕立 乏 』彳，政艮 ． J 、 植物器官、组织和细胞培养是 目前生物科学中十分活跃的研究领域之一。一方面利 用外植体的遗传保守性，可建立种质库、快速繁殖无性系和生产有用化合物等；另一方 面利用其遗传变异性，进行遗传操作，包括体细胞无性系变异、细胞突变体筛选、体细 胞杂交、外源DNA转化等方面的研究与利用。 与常规方法相比，从细胞水平上筛选突变体有许多优点，它可从大量细胞 中筛选到 所需要的个体，具有筛选群体大、效率高、时间短、操作简便易行、便于遗传分析等特 点。同时由于培养条件是可控的，细胞可进行重复的生长和选择，更加严格地确定突变体特 性。tlCarlson (1973)分离出第一个耐烟草野火病的突变体后，细胞突变体筛选技术 的研究发展很快，据不完全统计，国内外已先后从13种植物中获得了3O余个抗病突变体 有的已应用于生产，取得 良好的经济效益。 本文在详细地探讨了稻瘟病致病毒素的提取方法…1、致病效果 “，2、抗病筛选方法 与程序…、再生植株 的遗传变异…的基础上，结合突变体后代抗性鉴定及细胞 突变体 抗病性遗传分析和等位性测定结果，建立了水稻抗稻瘟病细胞突变体筛选技术体系，并 评价 了在品种改 良上的应用途径与潜力。 一 、 根冠细胞法测定毒素致病性 1983年美国学者Hawes首先用玉米小斑病菌毒素 (HMT)对离体玉米恨冠活细胞进行 车文于1991年l】月10日收到。 ●国家 自拣科学基盒资助项 目 束秀英 高攫芳 按晴牧 卢勤．王顺英 许文露 王克义等同志参加 了都舟工怍，谨此致酣 5期 陈启锋等：水稻抗稻瘟病细胞突变体筛选技术体系的建立及其在品种改 良上的应用 5l 细胞死亡率测定 。本研究选用南方稻区生理优势小种ZAl、ZBn、PO|和H 等4个菌 丝悬浮液制备稻瘟病致病毒素 (供试菌株 由本院植保系和上海农业科学院作物所提供)， 处理1．0—2．0cm 长胚根的根尖。将根尖轻轻投入盛有不同菌株 的致病毒素 (浓度25％， V／V) 的小烧杯中。在液体快速撮合器上振荡 3分钟，再放入25。C沮箱中处理3小时 然后从中取液 1滴在载玻片上，加 1滴0．01％中性红磷酸缓冲液 (pH6．5)染色 5分钟 后，再加 1滴0．2％伊文斯兰染色 5分钟，然后在显徽镜下记录活细胞和死细胞数量。以 无菌水处理为对照。凡液泡着红色为活细胞，着蓝色为死细胞；核着红色或蓝色的均为 死细胞，不着色细胞不计数。致病毒素的制备方法已有报道…1。 寰 1 不同抗性木稻品种枉矗■囊 定比较 Table 1 Comparison ofthemortali蚵 ofroot-cap cells in variousresistantcultivarsin n sa／~va L 1)3扶重