试验十五脂质体的制备.doc

实验十五 脂质体的制备 一、目的要求 1．掌握薄膜分散法和逆相蒸发法制备脂质体的工艺。 2．掌握用阳离子交换树脂法测定小檗碱脂质体包封率的方法。 3．熟悉脂质体形成的原理及其作用特点。 二、实验提要 1.含义 脂质体是指药物包封于类脂双分子层形成的薄膜中所制成的超微型球状的药物载体。根据类脂双分子层的层数的不同，脂质体可分为单室脂质体（含大、小单室）和多室脂质体。 2.制备要点 脂质体的制法有多种，应根据药物的性质或需要进行选择。经典的薄膜分散法可形成多室脂质体，再经超声处理可得到小单室脂质体。此法操作简便，但包封率较低。注入法有乙醚注入法和乙醇注入法两种，乙醚注入法是将磷脂、胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等溶于适量的乙醚中，在搅拌下慢慢滴于55℃~65℃水性介质中，蒸去乙醚，继续搅拌1小时～2小时，即可形成脂质体。此法适于实验室小量制备脂质体。乙醇注入法制备脂质体，脂质体混悬液一般可保留10%～20%乙醇。此法适用于不耐热的药物。反相蒸发法是制备多层脂质体或大单室脂质体的方法，此法包封率高。冷冻干燥法适用于水中不稳定药物脂质体的制备。熔融法制备的脂质体为多相脂质体，其性质稳定，可加热灭菌。 3.质量评价指标 有粒径、粒径分布和包封率等。包封率是评价脂质体内在质量的一个重要指标，常见的包封率测定方法有分子筛法、超速离心法、超滤膜法和阳离子交换树脂法等。阳离子交换树脂法是利用离子交换作用，将带正电荷的未包进脂质体中的药物（即游离药物），如本实验中的游离小檗碱，吸附除去。而包封于脂质体中的药物，由于脂质体带负电荷，不被阳离子交换树脂吸附，从而达到分离的目的，用以测定包封率。 4.其他 制备脂质体的材料主要有磷脂和胆固醇。磷脂有天然磷脂（豆磷脂、卵磷脂等）和合成磷脂（二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱等）。胆固醇为两亲性物质，是常用的附加剂，与磷脂混合使用，可制备稳定的脂质体。其作用是调节双分子层的流动性，减低脂质体膜的通透性。其他附加剂如十八胺、磷脂酸等，具有改变脂质体表面电荷的性质。 制备脂质体可分为三类：小单室（层）脂质体，粒径在20～50nm，凡经超声波处理的脂质体混悬液，绝大部分为小单室脂质体，多室（层）脂质体，粒径约为400～3500nm；大单室脂质体，粒径约为200～1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多属这一类。 -----脂质体混悬液中总的药物浓度 -----未包入脂质体中的药物浓 影响脂质体包封率的因素有多种，如磷脂质的种类，组成比例，制备方法及介质的离子强度等。 包封率的测定方法有凝胶过滤法，常用凝胶为Sephadex G50、G100或者说Sephrouse 4B、6B。超速离心法、透析法、超滤膜过滤法等，根据条件加以选择。 三、实验内容 盐酸小檗碱脂质体的制备 【处方】 豆磷脂 0.75g 乙醚 35mL 胆固醇 0.25g 盐酸小檗碱溶液（1mg?mL-1）25mL 共制成脂质体25mL 【制法】 1．磷酸盐缓冲液（PBS）的配制 称取磷酸氢二钠（Na2HPO4?12H2O）3.7g 与磷酸二氢钠（NaH2PO4?12H2O）20g，加蒸馏水适量，加热溶解，稀释成1000mL，即得0.067mol?L-1的磷酸盐缓冲液（pH约为5.7）。 2．盐酸小檗碱溶液的配制 称取盐酸小檗碱适量，用0.067mol?mL-1磷酸盐缓冲液配成1mg?mL-1和3 mg?mL-1的两种浓度药液。 3．盐酸小檗碱脂质体的制备 称取处方量豆磷脂、胆固醇置150mL小烧杯中，加入35mL乙醚，在磁力搅拌器上搅拌溶解，加入盐酸小檗碱溶液（1mg?mL-1）25mL，继续搅拌，乳化，直到乙醚挥尽成为黄色的乳状液，即为小檗碱脂质体。 本品在显微镜下观察，为多层囊状或多层圆球， 【作用与用途】抗菌药，制成多种剂型，用于癌症的治疗。 【质量检查】 1.性状 为多层囊状或多层圆球，大部分粒径在0.7μm~1.2μm之间。 2.包封率的测定 (1)阳离子交换树脂分离柱的制备： 称取已处理好的阳离子交换树脂约1.5g，装于底部已垫有少量玻璃棉的5mL注射器筒中，加入PBS水化阳离子交换树脂，自然滴尽PBS，即得。 (2)柱分离度的考察： ①空白脂质体制备 称取豆磷脂0.9g、胆固醇0.3g于小烧杯中，加乙醚10mL，搅拌使溶解，旋转该小烧杯使乙醚在杯壁成膜，用洗耳球吹风，将乙醚挥去。另取磷酸盐缓冲液30mL于小烧杯中，置磁力搅拌器上，加热至55℃~65℃保温10分钟，再在同样温度下，搅拌30~60分钟（溶液体积少，补加PBS），即得。 ②盐酸小檗碱与空白脂质体混合液的制备 精密量取3mg?mL-1的盐酸盐酸小檗碱溶液0.1mL，置小试管中，