3第三讲限制性酶切提方式及连接.pptVIP

限制酶切方式及连接 1 限制酶切的方式 1.1 单酶切 1.2 双酶切 1.3 部分酶切 1.4 完全酶切 1限制酶切的方式 1.1 单酶切 若DNA样品是环状DNA分子，产生与识别序列（n）相同的DNA片段数。 若DNA样品是L—DNA片段，完全酶切产生n+1个DNA片段。 1限制酶切的方式 1.1 单酶切 酶切体系： 13μL ddH2O 反应体系 2μL 10×buffer 4μL 底物DNA 1μL 限制酶 总体积：20μL 酶切步骤： ⑴加样； ⑵摇匀，短时离心； ⑶反应1—3h； ⑷反应终止。 65℃水浴10—15min 1限制酶切的方式 1.2 双酶切 用不同的限制酶切割同一DNA分子的方法。 环状DNA分子完全酶切的结果，产生DNA片段数是两种限制酶识别序列数之和。 线性DNA分子完全酶切的结果，产生DNA片段数是两种