不同砷化合物对人胚肾细胞系HEK293毒性的研究.docVIP

不同砷化合物对人胚肾细胞系HEK-293毒性的研宄 张娜(太航医院 山丙太原 030006) 目的观察不同砷化合物对体外培养的的人胚肾细胞系HEK-293细胞毒 性。方法培养的HEK-293分别暴露于三氧化二砷(As2O3, iAs III, 0? 50mu;mol/L)、砷酸氢二纳(Na2HAsO4bull;7H2O, iAs V , 25?500mu;mol八)、 二甲基砷酸钠(C2H6ASO2Na ? 3H2O, DMA, 25?500mu;mol/L) 24h,应用四 甲基偶氮哇盐(MTT)法测定细胞生存率。结果不同剂量范围内的iAslII、iAsV除 了 50, 100, 300mu;mol/LC2H6AS02Na ? 3H2O 均能够显著降低 HEK-293 的细 胞生存率(Plt;0.05;对细胞的毒性从从大到小依次为JAslIlgtJAs V gt;DMA。结 论通过氧化应激损伤，三种形态砷化物在一定剂量范围内对人胚肾细胞系 HEK-293细胞有毒性作用。 关键词 三氧化二砷砷酸氢二钠砷中毒人胚肾细胞系 R914 A 2095-1752 (2013) 22-0120-02 随着社会发展，砷在工农业、医药及化学领域被广泛应用，这在不同程 度上造成环境污染，直接或间接影响到人体的健康。但由于目前通过动物实验无 法模拟其致癌性，其慢性中毒机制及癌变机制尚不清楚。砷进入机体后迅速入血 并随血液分布到全身各个器官，肾脏为其排泄、蓄积和毒性作用的主要靶器官［1, 2］。目前，有关砷暴露对肾脏和肾细胞影响的实验研究尚不多见，木研究观察不 同砷化合物对体外培养的人胚肾细胞系HEK-293的细胞生存率影响，为进一步了 解不同形态砷对肾脏损伤的作用方式提供研究基础。 1实验材料 1.1主要试剂 三氧化二砷(衡阳市福鑫化工厂)，砷酸氢二钠(上海新宝精细化工厂)， 二甲基砷酸钠(上海沪峰化工有限公司)，甲基偶氮唑盐(MTT,美国Sigma公同｝。 1.2仪器 C02培养箱（日本三洋公司）,低温离心机（日本Sigma公司），倒置显微镜 （连庆88078）,酶标仪（Modell680,日本）。 2实验方法 2.1细胞培养 HEK-293细胞常规方法培养。以含10%胎牛血清，100U/ml青霉素， 100mu;g/ml链霉素的DMEM高糖完全培养液培养HEK-293细胞株，置于37°C,5% CO2培养，待细胞进入对数生长期，用0.15 %胰蛋白酶消化传代。 2.2细胞处理 待细胞生长良好，取对数生长期细胞胰酶消化后，l*105/ml密度接种 于96孔板上（留有8个孔未加细胞，做空白对照），l*105/ml密度接种于24孔 板上，培养24小时后，分别加入含砷化物培养液，各种砷化物浓度分别为， As2O3:0, 0.25, 1.0, 25.0, 50.0mu;mol/L； Na2HAsO4bull;7H2O： 0, 25.0, 50.0, 100.0, 200.0, 300.0, 400.0, 500.0mu;mol/L；二甲基砷酸：0, 25.0, 50.0, 100.0， 200.0，300.0, 400.0，500.0mu;mol/L。0.25?300mu;mol/L 每小组设立 7 个平 行孔，400.0和500.0mu;mol/L每小组设立5个平行孔，设立8孔只加培养液， 不加细胞和任何药物作为阴性对照。每孔最终体积为200mu;L。将培养板置于 37°C, 5%CO2培养箱分别培养24h。 2.3四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞增殖率 接种96孔板细胞与As2O3, Na2HAsO4bull;7H2O,二甲基砷酸共培养 24h的HEK-293细胞每孔加入5g/LMTT液20mu;L,继续培养4h后吸除培养液， 各加入二甲基亚砜200mu;L，震荡lOmin。在酶标仪上测定各组在波长570nm 和490nm的吸光度值，根据公式：细胞相对生长抑制率=1-（实验组A值/对照组 A值）times;100%,计算各组HEK-293细胞的生长抑制率［3］。 2.4统计分析 所有的统计数据以均数plusmn;标准差（x-plusmn;s）表示，统计分析 用Sigmaplot 12.0统计软件，采用t检验进行分析，P0.05有统计学意义。 3实验结果 不同砷化物对HEK-293细胞增殖的影响 表1可见As2O3 0.25-50.0mu;mol/L组与阴性对照组相比，吸光度值均 显著降低(0.25mu;mol/L 组：Ple;0.05；其他：Ple;0.01)，1.0mu;mol/L 组 最低，As2O31.0-25mU;mol/L浓度区间存在线性关系，即随浓度增加抑制率逐 渐降低。结果表明0.25-50.0mu;mol