原子力显微镜鄄荧光显微镜联用技术在活细胞单分子检测中的应用.PDF

第45卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 评述与进展 第12期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2017年12月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 1813~1823 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.171313 原子力显微镜鄄荧光显微镜联用技术 在活细胞单分子检测中的应用 1,2 1,2 1,2 1,2 秦格格 摇 李文慧 摇 徐家超 摇 寇晓龙 1,2 1,2 *1,2 赵 容 摇 罗放 摇 方晓红 1(中国科学院化学研究所,中国科学院分子科学中心,分子纳米结构与纳米技术重点实验室,北京 100190) 2(中国科学院大学,北京 100049) 摘摇 要摇 原子力显微镜(Atomicforcemicroscopy,AFM)及荧光显微镜(Fluorescencemicroscopy,FM)是目前活 细胞单分子分析检测中最常用的两种工具。 结合两种显微镜的优势,发展高时空分辨、多功能的AFM鄄FM联 用技术成为近年该领域的研究热点。 本文简述了AFM单分子力谱和FM单分子荧光成像的原理,总结了 AFM鄄FM联用系统在仪器研制方面的发展概况,并结合本课题组在应用AFM鄄FM联用技术研究细胞膜上配受 体相互作用等方面的工作,介绍了其在活细胞单分子检测中的应用进展。 关键词摇 原子力显微镜;荧光显微镜;单分子荧光成像;单分子力谱;单分子分析;评述 1摇 引言 近一个世纪以来,显微成像技术的发展推动了对生命活动及其规律在微观层次上的研究,特别是在 分子水平上对细胞及细胞内生物分子的结构和功能的探究。 对于复杂的活细胞体系,其内部的生物分 子具有高度的非均一性(如生物大分子构象的多元性、生化反应的非同步性,所处微环境的多样性)。 而传统的生化分析方法是针对大量分子或分子聚集体系的测量,得到的平均性质常掩盖了单个生物分 [1] 子的特性 。 在活细胞体系上检测单个生物分子的信号,实现其结构特征、动态行为及相互作用的定 [2,3] 量表征,成为生命分析的前沿领域 。 原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)和荧光显微镜(Fluorescence microscopy,FM)是目前 应用最为广泛的活细胞单分子分析检测的工具。 AFM作为扫描探针显微镜家族的一员,是一种重要的 表面分析技术,通过检测探针与样品间的微弱相互作用力,实现对样品表面形貌的成像,具有纳米级的 空间分辨率;同时AFM单分子力谱尤为适合测定单对生物分子间的非共价键相互作用力,具有皮牛 (pN)级的测力灵敏度[4~6]。 而荧光显微成像一直是探测细胞形态与行为最常用的方法,随着单分子荧 光信号检测技术的突破,通过合适的荧光标记策略,结合荧光漂白步数分析,分子扩散运动分析以及荧 [7] 光强度分布分析等方法 ,可表征单个生物分子在生理及病理过程中的动态行为,探究其生物功能的 分子机制,具有高时间分辨和细胞内成像的优势[8~11]。 AFM及FM均可直接以活细胞为研究体系,在近生理条件下工作,对细胞功能干扰较小。 它们的成 像原理不同,但仪器装置兼容,检测优势互补,因而AFM鄄FM联用技术成为研究人员的关注热点,并得到 了长足发展。 本文结合本课题组的研究工作,简述了AFM单分子力谱和FM单分子荧光成像的原理,总结 了AFM鄄FM联用技术的发展概况以及近十年来在活细胞单分子分析检测中的应用进展。 2摇 原子力显微镜及荧光显微镜的单分子检测原理 2.1摇 AFM