基因构建的说一些知识.pptVIP

酶切、连接与质粒构建 何彰华 赢润生物技术 第一部分：限制性内切酶及酶切 1.1 限制性内切酶的简介 1.2 限制性内切酶的选择 1.3 常用酶切体系 1.4 酶切的应用 1.5 酶切常见问题及对策 1.1 限制性内切酶的简介 来源：原核生物。 限制性内切酶是DNA操作过程中所使用的基本工具。限制酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上，并在此切割双链DNA。分子克隆中常用的为II类限制酶，其识别位点长度为4、5或6个核苷酸的反向重复序列。 回文序列与非回文序列 DraIII的识别顺序 酶切位点的查询 酶切位点的查询 同裂酶 来源于不同物种但能识别相同DNA序列的限制性内切酶，切割位点可以相同也可以不同。 同序同切酶 同序异切酶 同尾酶 识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能酶切产生相同的黏性末端。 1.2 限制性内切酶的选择 根据实验的目的 结合载体和基因的特性选择合适的酶切位点； 根据酶本身的属性 酶的酶切效率； 双酶切共用缓冲液； 选择何种公司的产品：Fermentas、TaKaRa、NEB。 1.3 常用酶切体系-双酶切 双酶切buffer 1.4 酶切的应用 构建质粒 鉴定 图谱 1.5 酶切常见问题及对策 Dam、Dcm和CpG甲基化 ① 如果DNA底物是从表达 Dam