丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70与TLR4表达的影响.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 前言 脑血管疾病(cerebrovascular disease，CVD)是指在脑血管壁病变或血流障碍基础上 发生的局限性或弥漫性脑功能障碍。脑血管疾病的患病率、复发率、致残率、死亡率很高, 是导致全球人口死亡的三大疾病之一，严重危害人类健康。在我国脑血管疾病在人口死因 中居第一位，且发病年龄趋向于年轻化。2008年国家卫生部公布的第三次全国死因调查结 果显示，脑血管病已占死亡总数的22.45%，其发病率是欧美发达国家的4-5倍，是日本的 3.5倍，目前中国每年脑卒中新发病250万例，而每年死于脑卒中约有150万人，存活者 中有3/4留有不同程度的残疾，给家庭和社会带来沉重负担，且脑卒中导致人群寿命平均 缩短12年。其中以缺血性脑血管疾病(ischemic cerebrovascular disease, ICVD)发病 率最高，约占全部脑卒中的80%。 现代医学研究认为脑缺血再灌注损伤是大多数缺血性脑血管疾病的主要病理生理过 程。脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI)是指缺血受损 的脑组织区的血流超过再灌注再通时间窗（6h）下,再通血流对脑组织损伤继续加剧的病 理生理现象。其发生机制主要有自由基学说、钙超载学说、线粒体功能障碍、迟发性神经 [1][2] 元死亡(DND)学说等。近年来许多研究支持炎症反应参与了脑缺血再灌注损伤的发展 。 越来越多的实验证据表明,内源性配体激活TLR4可能是缺血再灌注损伤中最主要的炎症应 答的触发器,HSP70对坏死和凋亡都有抑制作用，而其作为内源性配体又可激活TLR4。 临床研究结果表明丁苯酞对急性缺血性脑卒中患者的中枢神经功能的损伤有改 善作用，可促进患者功能恢复，缺血性脑损伤的病理机制非常复杂，有多个病理环节 参与，是一个多基因多靶点参与的过程。国内研究表明，丁苯酞可阻断急性缺血性脑 损伤的多个病理环节，调解脑能量代谢，增加缺血区血流量，缩小脑梗死等，从而改 善脑梗死的神经功能缺损症状。缺血预处理能显著减轻缺血再灌注(I/R)导致的脑细胞损 伤,但是由于缺血预处理难以在临床重现,所以近年来国内外学者提出了一种新的概念— —药物预处理,即用药物替代缺血刺激,产生缺血预处理样的保护作用。丁苯酞预处理对脑 缺血再灌注损伤及诱导脑缺血耐受研究较少，且具体保护机制还不确切。 本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，探讨丁苯酞预处理对HSP70与TLR4 在局灶性脑缺血再灌注中的表达规律的影响。并探讨其可能的作用机制，为丁苯酞应用于 预防脑缺血再灌注后损伤的提供基础实验依据。 1 山西医科大学硕士学位论文 第一部分 线栓法制作大鼠局灶性脑缺血 再灌注损伤模型的实验研究 第一节 材料和方法 1．材料 1.1主要仪器及试剂 多聚甲醛 国产 电热恒温培养箱（Jc303 型） 上海成顺仪器仪表有限公司； 生物组织包埋机（JBM-A 型） 天津久圣医疗电子仪器有限公司； 切片机 德国 LEICARM2135； 图像分析仪、光学显微镜 德国 OLYMPUSBX60； 1.2实验动物 72只成年雄性Wistar大鼠，体重230±10g，山西医科大学生理教研室动物中心提供。 1.3主要试剂配制方法 ⑴ 4%多聚甲醛固定液的配制： 0.1MPBS1000ml 中加入多聚甲醛 40g，加热至透明，冷却后过滤，滴加1mol/L的 NaOH调节至pH值为7.2～7.4，4℃保存备用。 ⑵ 0.1M