小麦小花高纯度线粒体的分离及其蛋白质双向电泳体系建立.PDFVIP

ISSN 1007-7626 中国生物化学与分子生物学报 http :/ / cjbmb． bjmu． edu． cn 2013 10 年 月 CN 11-3870 / Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 29 (10):983 ～ 989 · · 技术与方法 小麦小花高纯度线粒体的分离及其蛋白质双向电泳体系建立 ＊＊ ＊＊ * ， ， ， ， ， 陈 征 王书平 张改生 宋齐鲁 郭佳林 车会学 ( ， / / 西北农林科技 大学 国家杨凌农业生物技术 育种中心 国家小麦改良 中心杨凌分 中心 小麦育种 / ， 7 12100) 教育部 工程研究中 心 陕西省作物杂种优势研究与利 用重点实验室 陕西 杨凌 摘要 应用差速 离心和 Percoll 不连续密度梯度 法分 离纯化 小麦三核 期 小花线粒体． 在 裂解液选 择 、IPG 胶条 pH 值 范围、SDS胶浓度及蛋白质上样量等方 面对线粒体蛋白质双 向电泳体 系 ， 进行探 索和优化 确立 了一套适用于小麦 小花高纯度 完整线粒体 的分 离方法及其蛋白质双 向电泳 ． ， 20% 、24 % 40% Percoll 28% Percoll 的技术体 系 结果表 明 采用 和 密度梯度和 自形成密度 高速 离 ， 、 ; TCA- ， 7 mol / L ，2 心体 系 获得 了有活性 高纯度 且较 完整 的线粒体 经 丙酮 法提 取蛋白 以 尿 素 mol / L 硫脲 ，4 % CHAPS( W/ V) ，65 mmol / L DTT ，0. 5% IPG 缓冲液( V/ V) ，0. 00 1% 溴酚蓝( W/ V) ， 17 cm ，pH 4 ～ 7 IPG 11% SDS， 160 g ， 裂解液溶解蛋白 采用 胶条和 分 离胶 上样量为 μ 硝 酸 ，