微生物学实验设计方案.docVIP

PAGE PAGE 2 食品生物危害性项目的分析检测 --饮用水检测及鉴定 一．实验目的 1、学习从自来水中分离、纯化微生物的原理与方法。 2、学习、掌握自来水中细菌、大肠杆菌的检测与鉴定方法。 二. 实验原理 1、采样：即采集含菌的样品 采集含菌样品前应调查研究一下自己打算筛选的微生物在哪些地方分布最多，然后才可着手做各项具体工作。 2、增殖培养（又称丰富培养） 增殖培养就是在所采集的豆腐干等含菌样品中加入某些物质，并创造一些有利于待分离微生物生长的其他条件，使能分解利用这类物质的微生物大量繁殖，从而便于我们从其中分离到这类微生物。因此，增殖培养事实上是选择性培养基的一种实际应用。 3、纯种分离 在生产实践中，一般都应用纯种微生物进行生产。通过上述的增殖培养只能说我们要分离的微生物从数量上的劣势转变为优势，从而提高了筛选的效率，但是要得到纯种微生物就必须进行纯种分离。纯种分离的方法很多，主要有：平板划线分离法、稀释分离法、单孢子或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。 4、微生物的形态特征： 细菌是单细胞原核微生物，基本形态为球状、杆状和螺旋状。有些细菌除具有共同结构外还具有鞭毛、荚毛、芽孢等特殊结构。 大肠菌群是一类革兰氏阴性无芽孢杆菌，24h内能发酵乳酸或半乳糖。 三．实验材料 1、器材：小刀一把、培养皿20个、量筒、滴管5个、吸水纸、试管30支、烧杯5个、三角瓶（100ml）6个、玻璃棒、乳钵、接种环、镊子、恒温培养箱、高温灭菌锅、天平、显微镜、血球计数板、酒精灯、纱布、漏斗、乳糖蛋白胨发酵管、带塞玻璃瓶、、滤纸、pH试纸、刻度吸管（1mL和10mL各5个）等。 2、试剂： 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、伊红美兰琼脂培养基、革兰氏染液 、乳糖胆盐培养基、95％乙醇、无菌水等。 ３、样品　自来水 自来水中的细菌含量检测 一、实验目的 （1）学习水样的采取和水样中细菌总数测定的方法 （2）了解和掌握平板菌落计数的原则 二、实验验原理 绝大多数腐生性和致病性的细菌，可在营养丰富的牛肉膏蛋白胨培养基上进行生长，出现肉眼可见的菌落，虽然这样设计出来的水中细菌的总数实际上是一种近似值，但它基本上能代表水样中细菌的数量。水中的细菌总数的测定和计算是指：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，1ml水样，经37℃，24h培养后所生出来的总菌数（包括腐生和致病细菌），我国饮用水的卫生学指标规定：在1ml自来水中细菌总数不得超过100个（1 ×102）。 三、仪器与用具 无菌培养皿（4个），无菌移液管1mL（10支），无菌移液管10mL（2支），无菌药勺，无菌称量纸，电子天平，恒温培养箱，100mL三角烧瓶（4个），精密pH试纸，菌落计数器。 四、试验步骤 1、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的制备 培养基成分：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂15-20g、水1000ml、pH7.4-7.6 配制方法： （1）称量：按培养基配方比例依次准确称取牛肉膏，蛋白胨，NaCl放入烧杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿称量，用热水溶化后倒入烧杯，也可放称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片； （2）溶化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃摇匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌溶解。将药品完成溶解后，补充水到所需总体积，如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分； （3）调pH：在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L HCl进行调节； （4）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入三角烧瓶内； （5）加塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能； （6）包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称，组别，配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用容易解开，同样用记号笔注明培养基名称，组别，配制日期； （7）灭菌：将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜，放回内层锅，并装入培养基，加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，加热，0.103MPa，121°C并同时打开排气，使水沸腾以排除锅内的冷空气，待冷空气完全排尽后，关上排气，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升，当锅内压力升到所需压力时，维持压力至所需时间。20min后，切断电源或者关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“ （