《论文-葡萄体表细菌对葡萄黑痘病菌作用的研究》-毕业论文.DOCVIP

PAGE 6 PAGE 1 葡萄体表细菌对葡萄黑痘病菌作用的研究 摘 要 本实验通过用无菌水清洗葡萄植株体表各部位，然后从洗涤液中分离出葡萄植株体表的细菌并进行培养，然后再从中筛选出与葡萄黑痘病菌存在拮抗作用的菌株。结果表明：在葡萄的体表细菌中确实存在与葡萄黑痘病菌有较强拮抗作用的细菌。对这些细菌进行保种，使其能更好的进行下一步的研究，同时也为葡萄黑痘病的生物防治奠定了基础。 关键词：葡萄黑痘病菌 葡萄体表细菌 拮抗作用 生物防治 Abstract This experiment by using sterile water cleaning grape body parts, and the washing liquid from the isolated from grape surface of the bacteria and culture, and then from the screened with Grape Black Pox bacteria antagonistic strains exist. The results show that: the grape surface bacteria and the existence of Grape Black Pox bacteria with strong antagonistic bacteria. So for these bacteria were preserved, so that it can better carry out the next step in research, but also for the grape black pox disease biological control foundation. Keywords: Grape black blain germs grape body antagonism of bacteria biological control 前言 黑痘病是我国分布最广、危害最严重的葡萄病害之一。是由半知菌亚门痂圆孢属菌引起的真菌病害，危害叶片、花序、果实等绿色细嫩部分，严重影响葡萄的质量与产量。目前，治疗黑痘病的药物大部分是化学药剂，长期使用，许多种类的黑痘病菌对这些药物产生了抗药性，致使用药量增加导致成本上升同时产量下降，果实品质变劣，对环境也产生很大的影响。 本实验利用细菌的拮抗作用来防治病害具有经济、环保的特点，本课题对黑痘病菌有拮抗作用的葡萄体表细菌进行筛选及研究，有望找到一种或几种抑制黑痘病菌的葡萄体表细菌，从而提高葡萄的质量及产量，为种植葡萄的农户获得更高的经济效益。对防治黑痘病的发生及降低药物成本具有重要的应用价值。 1. 实验试剂和器材的准备 1.1实验所需试剂：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌水、NaOH 1.2.实验用具：培养皿、烧杯、玻璃棒、电子分析天平、称量纸、酒精灯、锥形瓶、 接种环 蜡烛 试管 pH试纸 1.3.实验设备：高压蒸汽灭菌锅、微波炉、无菌操作台、电子显微镜、 烤箱、冰箱 2. 实验方法 2.1 采样 在新师院附近的葡萄园随机采集一定数量的包含植株各个部位的样本运回实验室，按部位进行分类。 2.2 病害症状观察 在葡萄园对发病葡萄植株病害的症状进行形态描述并记录，并用相机对症状进行拍照。 2.3葡萄体表细菌的分离、培养、筛选 2.3.1 葡萄体表细菌的分离及培养 ①将选出的病害植株和无害植株分别放在两个洗净的大烧杯中用无菌水浸泡搅拌。 ②将50个培养皿倒平板后均分为五组，并做好标记。 ?用接种环沾取洗出液分别接种到第一组，第二组培养皿上，其余三组接种葡萄黑痘病病原菌即葡萄痂囊腔菌，在生化培养室进行培养。 2.3.2对黑痘病菌有拮抗作用的菌株进行筛选 经过3到4d培养后，观察发现第一组培养皿长有两种类型的菌落而第二组培养皿有四种类型，然后将第一组培养皿和第二组培养皿内的各菌落分别接种到第三组和第四组培养皿上，继续在生化培养室中培养，再过3d后，观察并统计第三、四、五组培养皿黑豆病菌的生长情况。 2.4进一步筛选和纯化 2.4.1进一步筛选 将第二组得到的四种菌落分别标记为甲、乙、丙、丁，各自与葡萄黑痘病原菌共同接种于十个培养皿上，培养到4d，统计葡萄黑痘病菌的生长情况。 2.4.2 纯化 从拮抗作用最强的培养皿中挑选一个形态最好的菌落，采用平板划线法分离出纯种的丙细菌。 2.5对有拮抗作用的菌株进行保种 2.5.1用试管取少量培养基冷却至半固体状态 2.5.2.将菌种接种与试管斜面，然后置于培养箱中备用（试管保持倾斜角30