柱状嗜纤维菌的外膜蛋白和脂多糖及其对鳜的免疫原性.PDF

维普资讯 第 25卷 第 5期 水 生 生 物 学 报 V 2 ．N_I5 200 1年 9 月 ACTA HYDROBIOL0GICA SlNl【二A Sep ．20 )【1 0 一一一研简究一一一 柱状嗜纤维菌 的外膜蛋 白和脂 多糖及其对鳜 的免疫原性 报一 孙 宝剑 聂 品 (中国科 学 院水生生物研 究所 ；没水生态 与牛物技术 国家重 点实验室 ．武攫 430072 0UTER M EM BRANE PR0TEIN AND LIPOPOLYSACCHARIDE 0F Cy110P日AGA C0L 【^ NARJS AND THEIR IM M UNoGENICITY T0 THE MANDARIN FISH ．Sf～IPERCA CHUA1 J SUN Bao@anandNIE Pin tInstituteotH 岫 t ’甜 ．T ch… A~ademy。『Sciences；StateKeyl 1砒0y。{ Fresh r＆utu and Biotech~ loKv Wuhan -130072、 关键词 ：柱状嗜纤维菌；外膜蛋 白；脂多糖 ；鳜 Key words： Cytophaga columnaris Outer membrane protein； Lipopolysaceharide； Siniperca c L 中围分类号：$941．42 文 献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3207{2001)05一I]524—04 柱状嗜纤维菌 (( 。 agacy,lumnarisRe[chenbach)叉名柱状屈挠杆 菌 【Fles~bacter Ⅲ Lead better)．这种细菌感染 几乎所有 的淡水鱼类 柱状嗜纤维菌可造成严 重 的鳃 和皮肤病变 ，直至引起鱼的 死亡 ”。国内已经分离到多株柱状嗜纤维菌 。外膜蛋 白和脂多糖是构成革兰 氏阴性菌表面抗原最主要 的成分 ，它们作为重要 的保护性抗原而 l起重视 。鳜 (Siniperca~huatxi)是我 国名特忧养殖 的重要 晶种 之一 ，近年来各种病害的发生严重地影响其产量 而柱状嗜纤 维菌是危害鳜 的病原之 一。本文 旨在研 究这种细菌 的外膜 蛋 白和脂多糖 的不 同组分对鳜 的免疫原性 ．找 出免疫原性最强的组分 ，为今后 的疫苗 的研制提供参考 l 材料 与方法 1．1 细菌的培养 菌株从患病鳜分离 ，由华中农业 大学胨 昌福先生惠赠 。细菌在 25℃条件下于牯细 菌培养基 中培养 48h．然后离心 20min集菌 (1000r!min．4C)。 l，2 外胰蛋 白的提取 外膜 蛋 白的提取按照 Nikaido的方法 进行 细 菌用 20mm。IiLTm HCI缓 冲 液 (pH72)清 洗后 ，悬 fi-于 20mm0LTris-HCl缓 冲液 (oH7 2，内含 DNase和 RNas．e1g-g,rn[．PSDF 50gg／mL) 超声波粉碎后，离心 30rain (1000r／m[n．4℃)，弃去沉淀 ，上清液超 离心 1h(40，ooo6瑚in． 收稿 日期 ／2001—02 08；修订 日期 {2001 03—20 基盘项 目：国家杰 出青年科 学基金项 目；技水生态 与生物技术 国家重 点宴验 室项 目(2000FB02)；中国 科学 院院长基金 (院基计字 750) 作者筒介 ：孙宝剑(1975一 )．男，山东临沂^ ；在