大鼠骨髓间充质干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的标志基因表达受组蛋白乙酰化调控.PDFVIP

第３５卷第２１期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．２１ ２０１３年１１月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　 Ｎｏｖ．１５　２０１３ ２２９５ 文章编号：１０００５４０４（２０１３）２１２２９５０６ 论著 大鼠骨髓间充质干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的标志基因表达受组蛋白乙酰化调控 徐梦遥，王延洲，徐惠成　　（４０００３８重庆，第三军医大学西南医院妇产科） 　　［摘要］　目的　通过骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）与膀胱平滑肌细胞（ｂｌａｄｄｅｒ ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ，ＢＳＭＣｓ）接触共培养探讨组蛋白乙酰化对ＢＭＳＣｓ分化能力的影响。方法　 分别采用密度梯度离心法 和胶原酶消化法培养大鼠ＢＭＳＣｓ及ＢＳＭＣｓ至第３代，并对ＢＭＳＣｓ进行了鉴定；以单独培养的ＢＭＳＣｓ作为对照组，接触共 培养的ＢＭＳＣｓ为实验组；运用免疫荧光化学染色法分别对２组 ＢＭＳＣｓ中的平滑肌标志性蛋白平滑肌 肌动蛋白（ α α ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ， ＳＭＡ）、平滑肌肌球蛋白重链（ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｍｙｏｓｉｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎ，ＳＭＭＨＣ）、Ｃａｌｐｏｎｉｎ进行检测， α Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测 ＳＭＡ蛋白、Ｃａｌｐｏｎｉｎ蛋白在ＢＭＳＣｓ中的表达，并用微球菌核酸酶（ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｌｎｕｃｌｅａｓｅ，ＭＮａｓｅ）对平滑 α 肌３个标志性基因的启动子区进行了染色质开放性的检测，同时运用了ＣｈＩＰ技术分析了 ＳＭＡ、ＳＭＭＨＣ启动子区组蛋 α 白乙酰化水平对ＢＭＳＣｓ向平滑肌分化的影响。结果　 大鼠原代ＢＭＳＣｓ流式检测显示ＣＤ２９表达阳性，阳性率为９９．８％， ＣＤ３１、ＣＤ４５表达阴性，阳性率为６．３０％、１．０４％；免疫荧光显示平滑肌３种标志性蛋白的表达均随时间的延长而增加； Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示随着共培养天数的增加 ＳＭＡ蛋白、Ｃａｌｐｏｎｉｎ蛋白在实验组中的表达相比对照组有明显的增加； α ＭＮａｓｅ显示实验组的ＢＭＳＣｓ启动子区染色质对核酸酶的敏感性明显高于对照组，ＣｈＩＰ显示实验组中ＢＭＳＣｓ平滑肌标志 性基因 ＳＭＡ、ＳＭＭＨＣ、Ｃａｌｐｏｎｉｎ启动子区Ｈ４乙酰化水平较未分化前明显增加（Ｐ＜０．０５）。结论　 组蛋白乙酰化程度 α 的增加促进了ＢＭＳＣｓ向ＢＳＭＣｓ分化。 　　［关键词］　 骨髓间充质干细胞；膀胱平滑肌细胞；组蛋白乙酰化；启动子 　　［中图法分类号］　Ｒ３２２．６２；Ｒ３２９．２；Ｒ３９４．２　　 ［文献标志码］　Ａ Ｈｉｓｔｏｎｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｒｋｅｒｇｅｎｅｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｒａｔ ＢＭＳＣｓｔｏＢＳＭＣｓ ＸｕＭｅｎｇｙａｏ，ＷａｎｇＹａｎｚｈｏｕ，ＸｕＨｕｉｃｈｅｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙａｎｄＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００３８，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｈｉｓｔｏｎｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆ ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＢＭＳＣｓ）ｄｉｒｅｃｔｌｙｃｏｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈｂｌａｄｄｅｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ （ＢＳＭ