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重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9对小鼠胚胎肝脏干细胞诱导分化影响的体外研究
陈 聪，罗 庆，毕 扬，陈 肯，田 雯，迭小红，曹光彪，周建武，康 权 （400014重庆，重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室、儿科学重庆市重点实验室、重庆市（儿童发育重大疾病诊治与预防）国际科技合作基地）
[摘要] 目的 探讨重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9（Adv-BMP-9）诱导小鼠胚胎肝干细胞向成熟肝细胞定向分化的影响。方法 将已构建的表达BMP-9、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒，分别感染小鼠胚胎肝干细胞，诱导其分化，然后采用半定量PCR、Real-time PCR、细胞免疫荧光、荧光素酶报告基因检测等方法检测甲胎蛋白（AFP）、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白18（CK18）等肝细胞标志物的表达. 结果 半定量及Real-time PCR检测，诱导7d后的BMP-9组、HGF组AFP的mRNA表达△△C T 值分别为(0.027±0.0035)、(0.023±0.0021)，较GFP对照组(0.103±0.0180)显著下降，ALB的mRNA表达△△C T 值分别(0.041±0.0049) 、(0.031±0.0011) ，较GFP对照组(0.013±0.0017)明显升高,CK18的mRNA表达△△C T 值分别(0.094±0.0035) (0.083±0.0074) ，较GFP对照组(0.040±0.0083)明显升高（P 0.05）；细胞免疫荧光染色，诱导7d后的细胞胞浆内表达肝细胞特有的ALB、CK18等蛋白，而对照组几乎无表达；荧光素酶报告基因检测，诱导1、4、7d的BMP-9组、HGF组的ALB表达萤光素酶A值读数分别[(5509.35±213.08)，(33198.14±666.39)，(50815.03±1730.75) ]、[ (5539.25±132.62)，(31400.71±2622.39)，(49088.28±1868.03) ]，较GFP对照组(4732.49±68.22)，（9407.71±487.84），（20894.83±1100.54)明显升高（P 0.05）。 结论 BMP-9有诱导小鼠胚胎肝脏干细胞向成熟肝细胞样细胞分化的作用，并且BMP-9对小鼠胚胎肝干细胞的诱导分化作用甚至和传统的肝干细胞诱导分化因子HGF相当。
[关键词] 骨形态发生蛋白-9；小鼠胚胎肝干细胞；分化；重组腺病毒
[中图法分类号] [文献标志码] A
Adenovirus-mediated mouse bone morphogenetic proteins-9 induces Differentiation of mouse fetal liver stem cells differentiationinduced by Adenovirus-mediated mouse bone morphogenetic proteins -9 in vitro
Chen Cong, Luo Qing, Bi Yang, Chen Ken, Tian Wen ，, Die Xiaohong, Cao Guangbiao, Zhou Jianwu, Kang Quan (Key Laboratory of Child Development and Disorders Cofounded by Chongqing and Ministry of Education Key Laboratory of Child Development and Disorders, Key Laboratory of Pediatrics in Chongqing, Chongqing International Science and Technology Cooperation Center for Child Development and Disorders, Children’s Hospital, of Chongqing Medical University, Chongqing, 40014, China.)
[Abstract] Objective To determine the effect of recombinant adenovirus-mediated mouse bone morphogenetic proteins 9 (Adv-mBMP9) on the explore the differential regulation of mouse fet
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