卵磷脂的提取、纯化和鉴定.pptVIP

五、实验结果 1、卵磷脂收率 卵磷脂收率 = 卵磷脂粗品重量 / 蛋黄重量×100% 2、计算各组分的Rf 值 3、判断卵磷脂粗提物的组分 四种磷脂标准品的Ｒf值分别为:溶血卵磷脂0.18；神经鞘磷脂0.33；卵磷脂0.65；磷脂酰乙醇胺0.96 O A B C D O1 O2 E 六、思考题： 1、简述卵磷脂的生物学功能。 2、磷脂酰胆碱（卵磷脂），磷脂酰乙醇 胺（脑磷脂），磷脂酰丝氨酸，磷脂酰肌醇 的结构式。 3、何谓薄层层析？其原理和方法？ 4、制备硅胶-G薄层板与点样时应注意些什么问题？ 5、本实验中，哪一种组分的Rf值大一些？ 为什么？ * 卵磷脂的提取、纯化和鉴定 1、学习和掌握卵磷脂的提取和鉴定方法； 2、掌握薄层层析的原理、方法和应用。 一、实验目的 是细胞膜磷脂双分子层的重要成分。 卵磷脂又称磷脂酰胆碱，是甘油磷脂的一种。在动植物体内均有分布，在动物的脑、精液、心、肝、肾上腺和卵细胞中含量较多，蛋黄中含量可达8-10％。 其结构式为： 胆　碱 HO 磷脂易溶于乙醚、苯、氯仿，部分溶于乙醇，极难溶于丙酮；卵磷脂溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂，但不溶于丙酮；丙酮能够溶解油脂和游离脂肪酸、甘油三酯等。 因此，本实验用乙醇、乙醚为溶剂，丙酮为沉淀剂，干燥后获得卵磷脂。新提取得到的卵磷脂为白色蜡状物，与空气接触后因所含不饱和脂酸被氧化而呈黄褐色。卵磷脂中的胆碱，在碱性溶液中可分解为三甲胺，而具有特异的鱼腥味，可用于鉴定。 二、实验原理（一）卵磷脂的提取和纯化 物质提取、纯化受到多种因素的影响，如抽提物的种类及其配比、抽提条件（温度、时间等）都能影响提取的结果。这种多因素的试验可以通过正交法，即用一特制的表格—正交表来安排试验，计算和分析试验结果。这样就能通过少量试验取得较好的效果。 本实验运用正交法抽提物的种类及其配比、时间温度和料液比这4个因素对卵磷脂提取和纯化的影响，并求得在什么样的条件下可以达到最佳的试验效果。 正交法实验设计 水平 影响因素 [乙醇]∶ [乙醚] 温度 时间（min） 料液比 1 5∶1 4℃ 10 1∶4 2 4∶1 25℃ 20 1∶5 3 3∶1 60℃ 30 1∶6 表1 抽提物、温度、时间和料液比4因素3水平 表3 L9 表 按一般方法，如对4个因素3个水平的各种搭配都要考虑，共需做3*3*3*3=81次试验，而用正交表只需做9次试验，即选用L9表(L是正交表的代号，下标数字表示试验次数)。 试验号 影响因素 试验结果 [乙醇]∶ [乙醚] 温度 时间（min） 料液比 1 1 5∶1 1 4℃ 1 10 1 1∶4 2 1 5∶1 2 25℃ 2 20 2 1∶5 3 1 5∶1 3 60℃ 3 30 3 1∶6 4 2 4∶1 1 4℃ 2 20 3 1∶6 5 2 4∶1 2 25℃ 3 30 1 1∶4 6 2 4∶1 3 60℃ 1 10 2 1∶5 7 3 3∶1 1 4℃ 3 30 2 1∶5 8 3 3∶1 2 25℃ 1 10 3 1∶6 9 3 3∶1 3 60℃ 2 20 1 1∶4 I （I水平试验结果总合） II （II水平试验结果总合） III（III水平试验结果总合） I/3 II/3 III/3 级差 表4 试验安排 将本试验的4个因素依次放在L9表的第1，2，3，4列，再将各列的水平数用该列因素相应的水平写出来，就得到上表的试验安排。 （二）薄层层析 薄层层析（TLC）是一种微量而快速的层析方法。其层析是在吸附剂（固相支持物）均匀涂布的的薄层上进行的，故称薄层层析。而待分析的样品，是点加到薄层板的一端，然后将该端浸入适宜的展层剂中，在密闭的层析缸中展层。 由于各种物质的结构和性质的不同，其在吸附剂表面的吸附能力各异。吸附力大的易被吸附剂吸附，而较难被展层剂所解吸。吸附力小的则不易被吸附剂吸附，而易被展层剂携带至较远的距离。这样，各种物质在吸附剂和展层剂之间反复多次的被吸附与解吸附，就表现出不同的迁移率而得以分离，并可以通过与显色剂的显色反应而得到鉴定与区分。 三、实验材料、仪器和试剂 （一）卵磷脂的提取和纯化 1、实验材料：鸡蛋黄 2、仪器：恒温水浴锅 蒸发皿 漏斗 磁力搅拌器 天平 3、试剂： 95％乙醇 乙醚 丙酮 （二）卵磷脂的薄层层析 1、实验材料：提取的卵磷脂 2、仪 器： 电热鼓风干燥箱