一氧化氮(NO)对小鼠HCa-F_2c25_2f16A_2c3_细胞的细胞毒作用机制的分析.pdfVIP

缩 写 符 号 1.Bcl-2:B-celllymphoma/leukemia-2，一种癌基因的表达产物 2.BSA:Bovineserumalbumin，牛血清 白蛋白 3.C: Chloroform,氛仿 4.HPTLC:Highperformancethinlayerchromatography，高效薄 板层析 5.LPS:Lipoplysaccharide,脂多糖 6.M:Methanol，甲醉 7.MIM:Mitochordrialinner-membrane，线粒体内膜 8.MOM:Mitochordrialouter-membrane，线粒体外膜 9.MTT:Thiazolylblue,唾哇蓝 10.NBT:Nitrobluetetrazolium，亚硝基 四哇蓝 11.NO:Nitricoxide，一氧化氮 12.NOS:Nitricoxidesynthase，一氧化氮合酶 13.PC:Phosphatidylcholine,磷脂酞胆碱 14.PE:Phosphatidylethanolamine,磷脂酞乙醉胺 15.SDS:Sodiumdodecylsulfate，十二烷基硫酸钠 16.PAGE:Polyacrylaminde.gelelectrophoresis,聚丙烯酞胺 凝胶 电泳 17.PI:Propidiumiodine,碘化丙吮 18.PI3K:Phosphatidylinositol3-kinase,磷脂酞肌醉3-激酶 19.SNP:Sodiumnitroprusside，一亚硝基铁佩化钠 20.W:Water，水 一氧化氮 (NO)对小鼠腹水型肝癌HCa-F2;/16A3 细胞的细胞毒作用机制的研究 前 言 一氧化氮 (NO)是一种极活跃的无机小分子物质， 泛分布于 生物体内各器官组织中，参与机体多种生理与病理过程，包括 内皮依 赖性的血管舒张作用、抑制血小板粘附凝聚、传‘递神经信息、参与炎 症反应及巨噬细胞介导的细胞毒作用等(1-3).NO介导的细胞毒作用是 Hibbs等人在巨噬细胞介导的非特异性防御机制的研究中发现的闭。 现己证实，NO是巨噬细胞细胞毒作用的一个重要的效应分子改。当巨 噬细胞受到内毒素 (如脂多糖、卡介苗)或细胞因子如 (Y一干扰素、 肿瘤坏死因子、白细胞介素I、白细胞介素11)等单独或联合刺激后， 诱导诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)的合成，在后者的作用下，利用L- 精氨酸合成并释放大量的NO[s7，发挥细胞毒作用，从而杀伤外来的病 原微生物;7,s〕和肿瘤细胞[9] 随着研究的深入，NO的细胞毒作用机制己成为研究的热点。NC 可以引起靶细胞线粒体呼吸链的抑制 0〔3,DNA合成的抑制W〔和三梭 酸 循环体系中顺乌头酸酶的抑制汇’幻，其中有关 NO对靶细胞线粒体呼吸 链抑制的研究较多，但至今仍未完全阐明其作用机制. 一 为进一步研究NO的细胞毒作用及其机制，本实验用亚硝攀铁 氛化钠 (SNP)作为NO的供体 13〔)，选用小鼠淋巴道高转移腹水型肝癌 HCa-几/16A。细胞作为实验材料，研究了NO细胞毒作用与靶细胞线粒 体内膜蛋白和磷脂组分的改变及细胞周期中DNA含量的变化的关系， 以及NO对靶细胞Bcl-2及P工3K蛋白表达的影响，以期对NO的细胞 毒机制进行探讨。 材 料 与 方 法 一 材料 (一)细胞:小鼠淋巴道高转移腹水型肝癌细胞 HCa-F2;/16凡，由本校 病理教研室凌茂英教授提供。 (二)动物:昆明种小鼠，雄性，体重23-25克，来自本校实验动物 室 (三)主要试剂:亚硝基铁氛化钠 (SNP,AR，北京化I厂)，RMPI1640 培养基 (Gibco，美国)，新生小牛血清 (大连旅顺生物制品厂)， 唾哇兰 (MTT,Chemico)，碘化丙咤 (PI,Coulter，美国)， RNase(Coulter，美国)，洋地黄皂试(江苏化学试剂厂)，Lubrol (Sigma，美国)，细胞色素C(Sigma，美国)，高效层析薄板 (Merck,德国)，抗 Bcl-2抗体 (兔抗鼠，SantaCruzBiot