蛋白质组衍生肽段文库用于鉴定酪蛋白激酶2的底物模体-色谱.PDF

! ## 年$ 月 !#$ !% %$ $ ’(’)* ! ## !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 ’ ( ## 研究论文 +,- ：# $ )!*. /0 $ 1 $ ##!) $ ! ##$ ’ 蛋白质组衍生肽段文库用于鉴定酪蛋白激酶! 的底物模体 ! ! 张曼玉，, 王春丽，, 边阳阳，, 程, 凯，, 卫晓鸾，, 叶明亮 ，, 邹汉法 （中国科学院大连化学物理研究所，中国科学院分离分析化学重点实验室， 国家色谱研究分析中心，辽宁 大连 ##’!) ） 摘要：模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列，激酶底物通常具有一类特征性的模体，识别底物模体对鉴定激酶 底物具有重要意义。为了快速鉴定激酶底物模体，将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源，采用碱性磷酸酶 去除肽段的固有磷酸化后构建了用于筛选激酶底物模体的肽段文库。该肽段文库是大量非磷酸化肽段的混合物， 将此混合肽段与酪蛋白激酶! 和三磷酸腺苷作用) 68: 后，通过固定化金属离子亲和色谱法富集磷酸化肽段，采 用反相液相色谱5 串联质谱分析，成功地鉴定到*! 条非冗余底物肽段，包含*- # 个非冗余磷酸化位点，并由此得到 底物模体 /. 25 +. 45@5 +. 4 。该法能够快速准确地筛选出激酶底物模体，对研究激酶5 底物识别以及信号转导过程 具有重要意义。 关键词：固定化金属离子亲和色谱；反相液相色谱5 串联质谱；模体；激酶；肽段文库；蛋白质组学 中图分类号： ,’-$, , , 文献标识码：, , , 文章编号：#5$ #) （! ## ）$5’5’ !#$%#’( )%)$’*% +’,-. /# *%$%’0-$’#0 #/ 12,1$-$% #$’/ #/ (-1%’0 3’0-1% ! AB%C D7:E’ ，F%C G9’:#8 ，H-% I7:(E7:( ，GB4%C J78 ， F4- K87#’7: ，I4 D8:(#87:( ! ，A,L B7:;7 ! （! # $ % ’ ()*+(,*+ *- #%. (+(,/*0 #1/%01% - *+ 0(2,/1(2 !3%4/5 ,+ ，6 (,/*0(2 !3+*4 (,*7+(. 3/1 8 9 :! 9 !%0 ,%+ ，; (2/(0 05 ,/,= ,% *- !3%4/1(2 35/15 ，!3/0%5% 1(?%4 *- #1/%01%5 ，; (2/(0 #$% ，!3/0( ） 4,1$-($ ：/’M)*N7*3 6*8; 8) ; (N37* 86?N*7:3 8: O8:7)35 )’M)*N7*3 N3(:8*8: 7:= :*N8M’*3) 7 #* * *93 ’:=3N)*7:=8:( ; )8(:7# *N7:)=’*8: $ -: *98) )*’=E ，7 ?N*368 ?3?*8=3 #8MN7NE P7) (3:3N7*3= * =3*3N68:3 )’M)*N7*3 6*8; ; 7)38: O8:7)3 ! $ Q8N)*#E ，P9#3 3## #E)7*3