第二章特dna重组.pptVIP

基因工程 郑州大学生物工程系 主讲教师：刘红涛 第二章 DNA重组 DNA重组的概念及意义 在自然界，生物体内时刻发生DNA的重组，呈现出对生物有利或有害的变异。这种重组不受人们意志控制，重组结果难以预测。 基因工程涉及的DNA重组是根据人们的愿望，进行严密的设计，在生物体外通过人为的DNA片段化的重新连接，产生新的重组DNA分子，使其遗传信息发生变化，达到人们希望的目的。 2.1 DNA的组成和结构（略） 2.2 天然DNA的制备 2.2.1 天然DNA的来源和用途 2.2.2 天然DNA的提取 1、准备生物材料 选择生物种类；选择DNA易提取和含量高的组织；选择DNA得率最高的生长期。如: 大肠杆菌质粒DNA：应在对数生长期后期。 植物DNA：选幼嫩植株或黄化幼苗，减小淀粉对提取DNA的干扰。 肝脏DNA：要清除胆囊，主要是去除多种高活性的酶。 2、裂解细胞 这步是关系到能否提取到DNA以及DNA得率高低和质量的关键步骤。 原核细胞：用溶菌酶， NaOH和SDS ，煮沸，冰冻，超声波等方法； 结构复杂的动、植物材料：先必须粉碎（液氮冻结后研磨，或捣碎机、研钵直接粉碎），再参照裂解原核的方法。 3 、分离和抽提DNA 提取总DNA：在裂解液中加适量酚／氯仿／异戊醇或氯仿／异戊醇等有机溶液，使DNA与蛋白质分开，用乙醇或异丙醇沉淀DNA，再离心。 提取叶绿体或线粒体