革兰染色方法.pptVIP

L/O/G/O 5章 细菌的感染与免疫 所需试剂 碱性染料--结晶紫 媒染剂（增强染料与细菌的亲和力）--碘液 脱色剂--95%的乙醇 复染液--蕃红花红溶液 实验步骤 1、接种 取清洁玻片，在玻片背面用铅笔画两个圆圈做标记。 将接种环在火焰上烧灼灭菌，在酒精灯附近打开培养皿。右手持接种环，用接种环从试管培养液中取一环菌，从酒精于载玻片左侧标记处涂成薄层。 将接种环在火焰上烧灼灭菌。 重复操作，完成两种菌的接种。 最后，将接种环在火焰上烧灼灭菌。 实验步骤 2、干燥 涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰。 3、固定 手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。 实验步骤 4、染色 （1）初染： 加结晶紫一滴，约一分钟，水洗。 （2）媒染： 甩去残水，滴加碘液并保持约一分钟，水洗。 （3）脱色： 将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒，立即用水冲净酒精。 （4）复染： 用番红液染1—2分钟，水洗。 实验步骤 5、镜检 干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。 以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。 实验注意： 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度 如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌； 而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。 L/O/G/O