凝集反题应实验.pptVIP

抗原抗体反应的类型 1．沉淀反应 √2．凝集反应 3．补体参与的反应 4. 中和反应 5. 免疫标记 凝集反应 是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后与相应抗体（或抗原）发生特异性结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。 　　在免疫学技术中，凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应两大类。　 间接凝集反应的应用 　　间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因此在临床检验中广为应用。 （一）抗原的检测 　人绒毛膜促性腺激素 　　检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的间接血凝试验。 （一）抗体的检测 　梅毒抗体 　类风湿因子　RF 一、 正向间接凝集试验 梅毒快速血浆反应素试验 Rapid Plasma Reagin （RPR） RPR试验 非梅毒螺旋体血清试验 这类试验的抗原分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混悬液，用来检测抗心磷脂抗体。由于这些试验具有相同的标准化抗原，所以敏感性相似。可用作临床筛选，并可作半定量，用于疗效观察。 非特异性类脂抗体测定 1、性病研究实验室试验（VDRL） 2、不加热血清反应素试验（USR） 3、快速血浆反应素试验 （RPR） 4、甲苯胺红试验（TRUST） 梅毒确认试验（三） 1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验 （FTA-ABS） 2、梅毒螺旋体蛋白印迹试验 （western blot test） 一、梅毒快速血浆反应素试验（RPR） [实验原理] 梅毒患者血清中存在着能与VDRL(类脂质)抗原发生凝集反应的反应素，本试剂利用这一原理，将VDRL抗原吸附于活性炭颗粒表面，当待测血清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的黑色凝块。 一、梅毒快速血浆反应素试验（RPR） [用途] 本方法能快速简单地测定梅毒病人血清中的反应素，可用于梅毒诊断和监测梅毒病人疗效。 试剂与器材 RPR试剂 梅毒阳性对照 梅毒阴性对照 纸片 专用滴管，针头，橡皮头 操作方法 1.分别吸取30微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。 2.另吸取30微升待检血清均匀铺加在纸卡的另一个圆圈中。 3.用专用针头，滴管吸取RPR试剂，分别垂直滴加30微升于上述血清中。 4.用RPR旋转仪水平转动卡8分钟，100转/分钟然后3分钟内在光线充足处判断结果。 结果判断 1.阴性反应（—）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。 2.弱阳性反应（+——++）：可见较小的黑色凝集物。 3.阳性反应（+++——++++）：可见中等或较大的黑色凝块，溶液清亮。 实验讨论 1.实验条件：在23?c—29?c度的环境下进行。 2.RPR试剂在使用前应充分摇匀。 3.血清中加入试剂后充分振荡使其混匀。 4.定性实验呈弱阳性或阳性者必须做定量实验才能了解患者血清中的抗体滴度，具体方法如下：将待检血清用生理盐水作倍比稀释（原血清，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32）然后对每个稀释按定性实验方法再进行测定并判断结果。 实验讨论 5.本实验只为过筛试验，实验呈弱阳性或阳性反应者，需结合临床进行综合分析判断，同时再做特异性密螺旋体实验加以确诊。 二、间接凝集抑制反应又称为胶乳凝集抑制试验 妊娠试验—HCG测定 HCG： 人绒毛膜促性腺激素，胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素 妊娠4-10周分泌量最大 HCG是一种不随胎盘重量增加而分泌增长的胎盘激素 HCG的结构 结构中包括α与β两个非共价键结合的亚基。α亚基与LH，FSH，及TSH的亚基相似，能与这些激素产生交叉免疫反应 而β亚基与这些激素有较大的差异，不存在于其他激素中，决定了生物活性和免疫活性的高特异性。临床上采用高效的抗HCGβ亚基 现试剂盒为HCG-β试剂 HCG检测方法 1，ELISA：酶联免疫吸附试验 2，单克隆抗体胶体金试验 3，化学发光免疫法 4，放射免疫技术 5，胶乳凝集抑制实验 6，血凝抑制试验：载体不同，吸附于RBC上 胶乳凝集抑制试验 实验原理 将含有可溶性抗原的待测标本先与已知抗体混合，充分作用后再加入抗原致敏的胶乳颗粒，因抗体已与标本中的可溶性抗原结合，胶乳颗粒不再出现可见的凝集现象。 结果判断 若试验出现明显的凝集为阴性反应，即HCG阴性； 而不出现凝集者，即为阳性反应，即HCG阳性。 临床意义： 1，诊断妊娠及宫外孕 2，滋养层细胞肿瘤的诊断与病情观察 3，先兆流产和不完全流产的诊断和监测 4，诊断异位HCG肿瘤如畸胎瘤，子宫颈癌，HCG可明显增高 思考题 试述直接凝集试验与间接凝集试验的区别？ * 凝集反应的类型 一、